甲氨蝶呤或来氟米特周期联合环磷酰胺对类风湿关节炎患者ABC转运蛋白超家族介导的多药耐药性逆转机制的研究

Rheumatoid arthritis (RA) is a systemic autoimmune disease characterized by irreversible joint destruction and disability. There is a broad consensus about the therapeutic alliance of disease- modifying anti-rheumatic drugs (DMARDs) should be used in the initial stage of RA, such as methotrexate (MTX) and leflunomide (LEF). The biggest challenge is multiple drug resistance (MDR) to DMARDs in RA treatment field. Increased drug efflux has been recognized as one of the most critical mechanism of MDR. The family of ATP-binding cassette (ABC) transporters is responsible for drug pumping out of target cells. Several inflammatory cytokines, including tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), interleukin-6 (IL-6) and interleukin-17 (IL-17), play a very important role for the expression of ABC transporters. But in the RA field, there is still no intensive study about how above-mentioned cytokines regulate the expression of ABC transporters. Through more than ten-years' clinical research, we observed that the therapeutic alliance of MTX/LEF and cyclophosphamide (CTX) has had better curative effect and lower rate of adverse reaction in treating RA. And we didn't found the emergence of MDR. How do these inflammatory cytokines regulate the expression of ABC transporters? Which trans-signaling pathway do the regulatory information transfer through? How can the therapeutic alliance of MTX/LEF and CTX overcome MDR synergistically in RA patients? This study will give the answer.

类风湿关节炎（RA）是一种以残毁性关节炎为主要特征的系统性自身免疫病，早期联合应用以MTX、LEF为代表DMARDs已在国际范围形成共识，目前RA治疗领域中的最大挑战是DMARDs多药耐药性（MDR）的产生。研究发现，ABC转运蛋白家族介导的靶细胞药物排出增加是产生MDR的最关键机制，而TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17等为代表的炎性细胞因子在其表达调控中扮演重要角色，但在RA研究领域中，目前尚无上述细胞因子对ABC转运蛋白表达调控的系统性研究。我科采用MTX或LEF周期联合CTX治疗RA，经十多年的临床观察，其疗效、安全性显著高于单用药及其他联合方案，且无明显MDR产生。上述炎症因子对ABC转运蛋白有何调控作用？其调控信息经哪条信号转导通路介导？MTX/LEF联合CTX能否在上述环节逆转DMARDs多药耐药性？本研究将给出答案。

类风湿关节炎（RA）是以慢性滑膜炎及关节软骨和骨破坏为特征的系统性自身免疫性疾病。目前RA治疗领域中的最大挑战是DMARDs多药耐药性（MDR）的产生。我科采用MTX或LEF周期联合CTX治疗RA，经十多年的临床观察，其疗效、安全性显著高于单用药及其他联合方案，且无明显MDR产生。研究发现，ABC转运蛋白家族介导的靶细胞药物排出增加是产生MDR的最关键机制，而IL-1β、IL-6、IL-17等为代表的炎性细胞因子在其表达调控中扮演重要角色，但在RA研究领域中，目前尚无上述细胞因子对ABC转运蛋白表达调控的系统性研究。MTX/LEF联合CTX治疗方案对逆转DMARDs多药耐药性的作用机制尚不明确。本研究通过分析P-gp、MRP1、BCRP在RA患者外周血淋巴细胞、滑膜细胞或CIA大鼠脾脏淋巴细胞的表达及DMARDs治疗前后的变化，从分子机制角度揭示MTX或LEF和CTX联合治疗协同逆转耐药的具体机制，以及细胞因子对耐药蛋白的表达的调控作用机制。结果显示： P-gp转运蛋白部分：RA患者外周血淋巴细胞P-gp的表达较健康组明显增加，并与疾病活动度(血沉、CRP、DAS28)有相关性，LEF或MTX联合CTX治疗效果较单药治疗效果好，降低P-gp的表达逆转耐药；在RA外周血淋巴细胞或滑膜细胞中P-gp表达水平的增高与IL-6、IL-17、IL-1β有一定的时间及浓度依赖性；在RA外周血淋巴细胞或滑膜细胞中IL-6通过ERK1/2、JAK2-STAT3信号通路上调RA的P-gp表达，以JAK2-STAT3信号通路为著，而TAK1-IKK信号通路参与IL-17对RA外周血淋巴细胞P-gp的调控，小剂量MTX联合CTX逆转耐药的机制可能通过抑制JAK2-STAT3通路下调IL-6诱导的RA外周血淋巴细胞或滑膜细胞P-gp的表达。BCRP转运蛋白部分：明确了BCRP与多重耐药产生具有相关性，炎性因子IL-6、TNF-α与 BCRP mRNA 水平呈正相关。MRP1转运蛋白部分：明确了MRP1的表达和疾病活动平行，联合治疗组较单药组降低MRP1表达，证实LEF或MTX联合CTX治疗一定程度上逆转MRP1表达。ABC转运蛋白家族之间比较：MRP1与P-gp具有相关性，可能在MDR中发挥更重要的作用。结论：MTX或LEF联合CTX通过调控细胞因子介导的ABC转运蛋白的表达，逆转MDR。