甲氨蝶呤或来氟米特周期联合环磷酰胺对类风湿关节炎Th17/Treg细胞平衡的影响及其机制的研究

Rheumatoid arthritis (RA) is a systemic autoimmune disease characterized by irreversible joint destruction and disability. There is a broad consensus about the therapeutic alliance of disease modifying anti-rheumatic drugs (DMARDs) should be used in the initial stage of RA, such as mathotrexate (MTX) and leflunomide (LEF). As a one of the key mechanisms, the imbalance of Th17 cells and regulatory T cells(Treg cells) plays a critical role for RA progression. Dendritic cells (DCs) can regulate the balance between Th17 cells and Treg cells. It may be a new theraputic target of RA. Through more than ten-years' clinical research, we observed that the therapeutic alliance of MTX/LEF and cyclophosphamide (CTX) has had better curative effect and lower rate of adverse reaction in treating RA. In our previous research, combination MTX/LEF with CTX can relieve inflammatory symptoms and retard joint damage in RA more significantly. They also had synergistic effect in our vivo and vitro studies. But we don't know whether the therapeutic alliance of MTX/LEF and CTX could synergistically regulate Th17/Treg balance. We will give the answer by observing the dynamic level of the DC subsets, Th17 cells, Treg cells, some relative cytokines and trans-singalling proteins in different theraputic groups.

类风湿关节炎（RA）是一种高度致残性的自身免疫病，早期联合应用以MTX、LEF为代表DMARDs已在全世界范围内形成共识。研究证实，Th17和Treg细胞之间平衡状态的打破是其发病机制的关键环节，而前者又与树突状细胞（DCs）的调控密切相关，这为RA的治疗提供了新靶点。我科采用MTX或LEF周期联合CTX治疗RA，经十多年的临床观察，其疗效、安全性显著高于单用药及其他联合方案。大量前期研究结果表明该方案能更有效的改善RA关节炎症状，延缓骨关节破坏，体外及动物实验亦已证实其发挥协同治疗作用。但二者联合能否协同调节RA患者Th17/Treg细胞的平衡尚不明确。本研究拟通过观察各治疗组不同亚群DCs、Th17、Treg细胞及相关细胞因子水平的动态变化，探讨MTX/LEF联合CTX协同调控RA患者Th17/Treg细胞平衡的具体机制，为MTX/LEF联合CTX治疗RA提供理论依据。

类风湿关节炎（RA）是以慢性滑膜炎所导致的关节软骨和骨破坏为特征的系统性自身免疫性疾病。早期联合应用以MTX、LEF为代表DMARDs已在全世界范围内形成共识，而Th17和Treg细胞之间平衡状态的打破是其发病机制的关键环节，而前者又与树突状细胞（DCs）的调控密切相关，这为RA的治疗提供了新靶点。我科采用MTX周期联合CTX治疗RA，经十多年的临床观察，其疗效、安全性显著高于单用药及其他联合方案。二者联合能否协同调节RA患者Th17/Treg细胞的平衡尚不明确。本研究通过观察各治疗组不同亚群DCs、Th17、Treg细胞及相关细胞因子水平的动态变化，探讨MTX联合CTX协同调控RA患者Th17/Treg细胞平衡的具体机制。结果显示：1）MTX周期联合CTX治疗CIA较单用药组更有效，联合治疗不但能够明显改善关节炎症状，而且能够有效抑制关节破坏。2）MTX周期联合CTX显著抑制脾MNCs CD4+IL-17+ Th17细胞的相对数量，相反上调CD4+CD25+FoxP3+ Treg细胞的相对数量，有效恢复Th17/Treg 细胞数量比值的平衡。同时亦证实联合治疗较单药更有效恢复Th17/Treg平衡。此外，MTX周期联合CTX能够协同抑制Th17细胞相关促炎因子 IL-17、IL-6及TNF-α的产生，相对转移Th17/Treg细胞平衡向以抗炎细胞因子IL-10为特点的Treg细胞。3）MTX联合CTX能够通过有效抑制STAT3通路激活，进而抑制pSTAT3蛋白/pSTAT5蛋白比值，从而更有效的恢复Th17/Treg细胞平衡。4）MTX联合CTX通过有效抑制细胞因子IL-17、IL-6、IL-1β及TNF-α的表达，阻断IL-6/IL-17/STAT3正反馈环路。5）CIA小鼠脾单个核细胞经磁珠分选获得Naïve T细胞，加入Th17和/或Treg细胞分化相应的细胞刺激剂，检测各治疗组对分化的影响。结果显示各用药组与Treg细胞分化组（对照组）相比，均有增加Treg细胞分化的趋势，联合组增加更明显。6）从树突细胞方面研究，结果证实MTX联合CTX可有效减少CIA小鼠体内成熟DC细胞的数量，并显著抑制成熟DC的功能。结论：MTX联合CTX能有效恢复Th17/Treg 细胞数量比值的平衡，增加Naïve T向Treg细胞的分化，减少成熟DC细胞的数量及抑制其功能。