鄱阳湖三角帆蚌肽聚糖识别蛋白家族及其在抗菌免疫中的作用研究

鄱阳湖是我国第一大淡水湖，盛产培育珍珠的三角帆蚌（Hyriopsis cumingii），帆蚌点状产气单胞菌（Aeromonas punctata hyriopsae）是其主要的细菌性病原。本项目通过克隆三角帆蚌肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition protein, PGRP)基因家族及其启动子，检测其PGRP家族成员融合蛋白杀菌及抑菌作用，并对免疫应答过程中，其PGRP基因在免疫组织中组成性表达和诱导性表达的研究，以及对PGRP与肽聚糖结合的分析和酰胺酶活性的检测，揭示三角帆蚌PGRP家族基因的结构特点以及PGRP家族在其抗菌先天免疫反应中的作用。本项目的完成不仅可以填补国内外在淡水蚌先天免疫模式识别蛋白研究领域的空白，而且其成果可以用于鄱阳湖生态经济区内淡水育珠蚌的病害防治。

三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）是我国特有淡水育珠蚌，肽聚糖识别蛋白等模式识别受体及热休克蛋白等免疫相关分子在其先天抗菌免疫反应中发挥重要作用。本项目通过高通量转录组测序、cDNA末端快速扩增技术（RACE）及其它分子生物学方法，克隆并研究了3条三角帆蚌肽聚糖识别蛋白基因（hcPGRPs）、3条热休克蛋白基因（hcHSPs）、3条免疫相关基因（hcTLR2L，hcGBP1，hcTNFAIP8L）及其他物种肽聚糖识别蛋白及免疫相关基因（pfPGRP-L，cpSelW）。.1）本项目所克隆得到的3条三角帆蚌肽聚糖识别蛋白分别命名为hcPGRPL1, hcPGRPS2及hcPGRPS3。其中，hcPGRPL1的cDNA全长为1716 bp，包含1263 bp的开放阅读框，编码420个氨基酸。hcPGRPS2的cDNA全长为1069 bp，开放阅读框为657 bp，编码218个氨基酸。hcPGRPS3的cDNA全长为1432 bp，开放阅读框为858 bp，编码285个氨基酸。.2）三角帆蚌3条热休克蛋白基因分别为hcHSP60，hcHSP70及hcHSP78。其中，hcHSP60基因cDNA全长为2807 bp，开放阅读框为1707bp，编码568个氨基酸。hcHSP70基因cDNA全长为2298 bp,开放阅读框为1974 bp，编码657个氨基酸。hcHSP78基因cDNA全长为3721 bp，开放阅读框长度为1995 bp，编码664个氨基酸。.3）三角帆蚌Toll-like受体2样基因（hcTLR2L）的cDNA全长为1177 bp，开放阅读框为1032bp，编码343个氨基酸。三角帆蚌干扰素诱导鸟苷酸结合蛋白1（hcGBP1）的cDNA全长为2419 bp，开放阅读框为1974bp，编码657个氨基酸。三角帆蚌肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样基因（hcTNFAIP8L）的 cDNA全长为1179 bp，开放阅读框为573bp，编码190个氨基酸。.4）黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白（pfPGRP-L）cDNA全长为1716 bp，开放阅读框为1410 bp，编码469个氨基酸。褶纹冠蚌含硒蛋白W基因（cpSelW）cDNA全长为858 bp，开放阅读框长为258 bp，编码85个氨基酸。