青蒿素－猫眼草黄素复配抗疟机理研究

目前世界范围内以青蒿素为基础的抗疟复方研发全部集中在一、二线抗疟药的组合上，而以干扰青蒿素肝代谢为机制的抗疟复方或复配尚未见文献报道。课题前期研究结果表明猫眼草黄素（CHR）等四种黄酮等比例混合物能显著抑制青蒿素的肝代谢，延长青蒿素体内作用时间。本课题首先以影响CHR提取、精制的参数为指标，优化从青蒿素工业提取的残渣中分离纯化CHR的工艺，为动力学和药效学研究提供原料；通过考察CHR对口服青蒿素大鼠血浆药代动力学参数的影响及其体内过程，并比较复配组和对照组大鼠肝微粒体7种主要CYP450酶亚型（CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4、CYP2C9、CYP2C19、CYP2A6、CYP2E1）的活性差异，确证CHR对青蒿素肝代谢过程的抑制作用；进行青蒿素-CHR抗疟复配的药效学研究，考察不同比例青蒿素-CHR复配的体内外抗疟活性，探讨抗疟机理，为青蒿素-CHR复配的进一步研发奠定基础。

项目首先对CHR纯化工艺进行考察，确定HPD-100的80%、95%乙醇提取物含CHR，对80%、95%乙醇提取物进行柱层析，石油醚-丙酮100:25有黄色结晶，反复纯化得CHR3 g（纯度≥98%），同时从工业废料中得到19个化合物，其中artemisilactone B（42.0 mg)为未见文献报道的新化合物；考察了不同复配比例CHR（1:1，1:2，1:4）对青蒿素大鼠血浆药代动力学参数的影响，表明ART单用组与复配组AUC差异显著（P<0.05，P<0.01），低、中、高复配组AUC分别是ART单用组的1.44，1.40，1.29倍，表明CHR能显著提高ART的生物利用度；不同配比的复配组之间无显著性差异；CHR对CYP2C9、3A4亚酶活性有显著的抑制作用（P<0.05），且在一定范围内呈剂量依赖性；对CYP2C19亚酶活性有显著的诱导作用（P<0.05）；对CYP2E1、2D6亚酶活性无作用；对CYP2A6亚酶活性有双重作用；CHR对CYP2C9（0-100 μmol/L）、3A4（0-10 μmol/L）亚酶活性的抑制作用均存在临界值（75 μmol/L及1 μmol/L）；CHR对CYP2C9抑制作用的IC50值为0.04 μmol/L，对CYP3A4抑制作用的IC50值为0.05 μmol/L；CHR对CYP2C9（Ki=7.28）、3A4（Ki=1.50）亚酶的抑制类型均为混合型抑制模型；CHR体内药代动力学研究表明灌胃给药吸收差，药动学曲线存在双峰甚至多峰现象；静脉注射消除半衰期极短，低、中、高剂量组t1/2分别为17.01 ± 8.06、24.62 ± 4.59、28.46 ± 4.63 min；CHR各剂量组小鼠原虫寄生率与安慰剂组无显著性差异，表明CHR无抗疟活性；ART组和CHR-ART复配组小鼠原虫寄生率显著低于安慰剂（P<0.05），且CHR-ART中复配组（1:2）抑制率高于ART组（P<0.05），低复配比例组（1:1）、高复配比例组（1:4）有提高ART活性的趋势，表明CHR-ART复配后能显著提高ART的抗疟活性，最佳复配比例为1:2；CHR-ART复配机理为CHR抑制ART代谢相关肝药酶CYP3A4或2C9的活性，AUC提高，抗疟活性增强，而非二药协同作用。