基于5-HT信号系统探讨电针治疗便秘型肠易激综合征的机制

The project is based on our long-term clinical and experimental researches about irritable bowel syndrome (IBS), combining the research progress of IBS pathogenesis and the importance role of 5-HT signaling system in it. We choose the 5-HT+/- and widetype mice as objects, modeling IBS-C with the ice pourstomach method which was internationally accepted. After treating mice with electroacupuncture, we observe the expression of 5-HT, 5-HIAA , 5-HT receptors, SERT in mucous layer, submucosa plexus, myenteric plexus and smooth muscle of colon through the method of immunohistochemistry, High-performance liquid fluorescence detection method, Western-Blot, RT-PCR and the transmission electron microscopy. Through the evaluation of expression changes in 5-HT, 5-HIAA , 5-HT receptor, SERT and the transport function of colon, we expect to explore the role of 5-HT signaling system in IBS-C with electroacupuncture.

本项目基于我们长期对肠易激综合征的临床和实验研究，结合目前肠易激综合征发病机制研究进展及5-HT信号系统在其中的重要作用，以5-HT4受体基因敲除杂合子（5-HT+/-, heterozygous, HT）小鼠及子代野生型（widetype, WT）小鼠为研究对象，采用目前国际公认的冰水灌胃法建立IBS-C模型，给予电针治疗，通过免疫组化、高效液相荧光检测法、Western-Blot、RT-PCR、透射电镜等方法观察小鼠结肠黏膜层、黏膜下层神经丛、肌间神经丛、平滑肌组织中的5-HT、5-HIAA、5-HT受体、SERT表达的变化及对结肠转运功能的评价，以期从5-HT信号系统揭示电针治疗IBS-C的作用机制。

肠易激综合征是临床最常见的胃肠道功能紊乱性疾患，5-HT信号系统被认为是参与肠道动力和感觉调节的重要神经递质，5-HT3型和5-HT4型受体对激动药或拮抗药的不同反应是近年来药物研发热点。本项目立足于论证针灸通过调节5-HT信号系统治疗IBS-C这科学假设，主要解决了Htr4基因敲除（Htr4 KO）小鼠及野生型（WT）小鼠 IBS-C 模型制备、电针调节5-HT 信号系统的重要靶点及其在IBS-C 病理机制中的作用和阐述电针刺治疗IBS-C 的主要作用途径三个关键问题。. 研究方法：以Htr4基因敲除杂合子小鼠和野生型小鼠为观察对象，采用Htr4基因敲除和冰水灌胃两种方法造模，成模后予电针干预。分别检测小鼠胃肠道传输时间、粪便颗粒数和含水量、在体结肠肌电，通过酶联免疫吸附法、免疫组织化学、免疫印迹法、透射电镜观察电针对动物模型血清5-HT浓度、局部结肠组织中5-HT阳性细胞数、5-HT3受体、5-HT4受体、SERT、小鼠结肠超微结构异常的影响。. 结果显示与野生型空白观察组比较，Htr4基因敲除组和胃肠传输时间显著延长，含水量显著较正常值下降，颗粒数减少，结肠组织5-HT表达增加，结肠肌电示慢波频率增加，幅值增大，变异系数升高。电针治疗后小鼠胃肠传输时间显著缩短、含水量升高、粪便颗粒数增加，冰水灌胃组小鼠结肠下调，结肠肌电示慢波频率降低，幅值减少，变异系数降低。电针干预后冰水灌胃小鼠结肠5-HT3R、5-HT4R表达回升；Htr4基因敲除小鼠电针干预后异常高表达的5-HT3R下调，但组织5-HT、5-HT4R无显著变化。针刺干预前后两组组织SERT均未呈现明显差异。电针干预后两种造模方式导致的结肠细胞超微结构损伤倾向均有改善。. 本研究在针灸调节功能性胃肠病效应及机制方面，运用基因敲除和冰水灌胃两种方法完成模型制备并施加电针干预，实验结果表明电针能调控5-HT3受体、5-HT4受体表达，阐明了5-HT 信号系统是电针刺治疗IBS-C 的重要途径。项目执行期间共培养研究生6人，发表学术论文13篇，SCI1篇。