从5-HT信号传导系统探讨痛泻要方拆方治疗腹泻型肠易激综合征的作用机制

采用醋酸刺激法建立IBS大鼠模型，用痛泻要方全方和拆方（单味药、健脾药组合和疏肝药组合）进行干预，用腹壁回缩反射和腹肌电活动评估大鼠内脏敏感性，用避水刺激法应激大鼠评估大鼠排便次数与粪便含水量；用小动物PET/CT和免疫组化法分别检测脑痛觉中枢中5-HT水平、5-HTR和SERT的表达；用HPLC、RT-PCR和Western Blot法检测大鼠大空肠、回肠和结肠组织中5-HT量、5-HTR和SERT的mRNA和蛋白的表达；观察痛泻要方组成药物的单体成分及其组合对嗜铬细胞KRJ-I表面TPRA1和5-HT的基础表达和分泌以及结肠细胞CACO-2表面SERT表达的影响，在TPRA1激动剂和SERT抑制剂作用下中药对KRJ-I表面TPRA1表达和5-HT分泌以及CACO-2表面SERT表达和摄取功能的影响，以此来阐明痛泻药方对5-HT信号系统的调节作用以及其各个组份在此调节作用中的相互关系。

内脏高敏感是IBS-D的主要病理机制之一，5-HT是引起内脏高敏感的一个重要递质。本项目从5-HT信号传导系统探讨痛泻要方对内脏高敏感的影响和机制。.㈠观察痛泻要方对内脏高敏感模型大鼠肠道5-HT含量、5-HT不同受体和SERT表达的影响。采用醋酸法建立内脏高敏感大鼠模型，用腹壁回缩反射法评价内脏敏感性，用ELISA检测空肠、回肠和结肠的5-HT含量，用RT-PCR和Western Blot检测各肠段5-HT1R、5-HT2R、5-HT3R、5-HT4R、5-HT7R和SERT的mRNA和蛋白表达。结果发现痛泻要方能降低模型大鼠的内脏敏感性，降低各肠段5-HT含量，减少各肠段5-HT1R、5-HT3R和5-HT4R的mRNA和蛋白表达，增加各肠段SERT的mRNA和蛋白表达，对5-HT2R和5-HT7R表达无影响。.㈡观察痛泻要方对RIN-m细胞表达TRAP1和分泌5-HT的影响。体外培养RIN-m细胞分为7组：阴性对照组、阳性对照组、痛泻药方低浓度组、中浓度组和高浓度组、健脾组和疏肝组。在静息与激活状态下，分别培养48小时与72小时，收集各组上清液及细胞，用HPLC检测5-HT浓度，用RT-PCR和Western blot检测TRPA1mRNA和蛋白的表达。结果发现在静息和激活状态下：⑴痛泻要方各组的TRPA1的mRNA和蛋白表达以及5-HT含量均明显低于阴性对照组，高于阳性对照组。⑵健脾组和疏肝组对5-HT分泌和TRPA1的表达均有协同作用。.㈢观察痛泻要方对CACO2细胞表达SERT和分泌5-HT的影响。体外培养CACO2细胞分为6组：阴性对照组、痛泻药方低浓度组、中浓度组和高浓度组、健脾药组和疏肝药组。在静息与抑制状态下，分别培养48小时与72小时，收集各组上清液及细胞，用HPLC检测5-HT浓度，用RT-PCR和Western blot检测SERT mRNA和蛋白的表达。结果发现在静息状态和抑制状态下：⑴痛泻要方各组的SERT的mRNA和蛋白表达均明显高于阴性对照组，而其5-HT含量均明显低于阴性对照组。⑵健脾组和疏肝组对5-HT分泌和SERT的表达均有协同作用。.因此痛泻要方可通过下调TRAP1和上调SERT表达来降低局部5-HT含量，以及抑制局部5-HT1R、5-HT3R和5-HT4R表达来降低5-HT所介导的内脏高敏感。