电针天枢穴对STC大鼠SCF/c-kit信号变化的调节作用

本项目在我们以往长期关于功能性便秘的临床和实验研究工作的基础之上，结合我们关于结肠慢传输型便秘(STC)和Cajal间质细胞SCF/c-kit信号变化相互关系的理论思考和预初研究结果，拟采用复方苯乙哌啶经口服的方法建立大鼠结肠慢传输型便秘模型，借助免疫组织化学、RT-PCR、免疫电镜等技术观察SCF/c-kit信号变化，并从信号传导通路途径来探讨电针天枢穴对慢传输型便秘大鼠Cajal间质细胞SCF/c-kit的调节作用，以期用生命科学的语言阐明针刺天枢穴对胃肠动力学影响的机制，为揭示临床上针灸治疗功能性便秘的机理提供有力的实验依据，从而指导临床实践。

慢传输性便秘（STC）是较常见的一类功能性顽固便秘，临床研究表明电针治疗有较满意疗效。在该病的诸多发病机制相关因素研究中，胃肠运动自主节律性的起搏和兴奋传导细胞—Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICC）的作用受到重视，其细胞表达受络氨酸激酶受体c-kit及其配体干细胞因子（SCF）调控。本项目从SCF/c-kit信号变化入手，分2个部分实验对电针治疗STC的作用机制进行了研究和分析。第1个部分，采用复方苯乙哌啶的饲养法建立STC大鼠模型，观察分析电针天枢穴对STC大鼠结肠肌电、结肠平滑肌结构、结肠ICC数量、结肠SCF和c-kit mRNA表达、SCF/c-kit基因表达率及结肠超微结构的影响。第1部分实验结果，与STC模型大鼠相比，电针天枢穴后大鼠的结肠慢波节律表现为近似正弦波样曲线；平滑肌细胞排列有序，平滑肌厚度、肠粘膜腺体分布均有显著改善；结肠ICC计数增加；c-kit和SCF基因表达上调；ICC平均阳性面积百分比在粘膜下环肌层表面、环肌层、肌间丛和纵肌层区域均有提高；结肠ICC数量明显增加，有完整的基膜，细胞核大，胞质少，有较多的线粒体、高尔基体和核糖体。第2部分实验深入研究电针对SCF/c-kit信号变化的调节作用，以BALB/c小鼠为实验对象，向其腹腔注射ACK-2抗体，拮抗结肠c-kit受体，建立小鼠结肠ICC缺失模型。第2部分实验结果，与模型小鼠相比，电针天枢穴后，结肠肌电表现为近似正弦波样曲线，少数有切迹呈双峰型，振幅较整齐；肌间神经丛区ICC计数增加；结肠c-kit蛋白及SCFmRNA表达均上调；间质细胞较饱满，细胞的细胞器形态较饱满，无变形坏死，胞质未见明显的水肿，细胞核形态较清晰、饱满，未见明显萎缩，ICC与周围细胞之间的连接结构存在，较清晰紧密。本研究表明电针能调节结肠SCF/c-kit基因表达，通过基因水平对SCF/c-kit信号变化进行调控，逆转STC动物模型ICC的表型，是电针治疗STC的机理之一。