miR-29b调控小鼠种植前早期胚胎发育的机制研究

miR-29b是我们筛选获得的早期胚胎发育相关、功能未知的microRNA。前期研究和分析发现：miR-29b在小鼠4细胞胚胎中表达较2细胞高4倍；miR-29b可调节Dnmt3a和Dnmt3b的表达；Dnmt3a和Dnmt3b在小鼠早期胚胎中有表达，并可能通过调控DNA甲基化水平影响胚胎发育；目前尚无有关miR-29b在植入前早期胚胎发育中作用与机制的研究。本研究拟：研究miR-29b及靶基因Dnmt3a和Dnmt3b在小鼠各阶段早期胚胎中的表达情况；观察该基因过表达或表达沉默对胚胎发育的影响及靶基因表达水平，评估miR-29b在早期胚胎发育中的功能；通过对miR-29b过表达或沉默的胚胎进行Dnmt3a和Dnmt3b的过表达和沉默，研究miR-29b对早期胚胎发育的作用机制。有关miR-29b与早期胚胎发育的关系尚无文献报道，课题具有源头创新性，为早期胚胎发育调控机制提供了新线索。

目的：研究MicroRNA-29b(miR-29b)在小鼠植入前胚胎中的表达模式，探讨其在小鼠植入前胚胎发育中的生物学作用。方法： 1、实时定量PCR法检测小鼠植入前胚胎中miR-29b及其下游DNA甲基转移酶3a/3b（Dnmt3a/3b）的表达模式。2、免疫荧光检测DNMT3A/B在植入前胚胎中的表达及定位。3、采用显微注射商业化的miR-29b抑制剂（inhibitor）或模拟物（mimic）对其在早期胚胎中的功能进行研究。结果和结论：1、miR-29b在小鼠二细胞阶段高表达，四细胞阶段开始表达下降，并在植入前维持较低的表达水平；Dnmt3a和Dnmt3b均在小鼠四细胞阶段表达量升高，其中Dnmt3a在囊胚期表达降低并维持在较低的水平；而Dnmt3b在植入前均维持在较高的水平；3、miR-29可负向调控Dnmt3a/3b表达，其活性的改变引起小鼠胚胎的甲基化水平改变，小鼠胚胎从桑葚期到囊胚期发育明显阻滞。提示miR-29b可能通过调控其下游Dnmt3a/3b表达影响小鼠植入前胚胎的甲基化水平，从而发挥重要的生物学功能。