Treg 细胞对Kupffer细胞介导的肝脏损伤的负向调节作用

病毒感染诱发的肝脏损伤主要来自过度活化的免疫细胞对被感染肝细胞的攻击。我们先前用病毒模拟物poly I:C和肝脏致敏剂D-GalN建立了爆发性小鼠肝炎模型，研究发现Kupffer细胞活化后进而激活NK细胞共同介导肝脏损伤。鉴于该模型的肝脏免疫损伤可以自愈，且肝内Treg细胞比例增多，我们推测Treg细胞可以负向调节过度活化的Kupffer细胞。本研究将利用自主建立的poly I:C/D-GalN诱导的肝脏损伤模型，首先通过Treg细胞清除实验和肝内转输实验证明Treg细胞对Kupffer细胞依赖的肝损伤有负调作用，并明确Treg细胞对Kupffer细胞活化程度及效应功能的影响。进一步用流式细胞术探寻Treg细胞与Kupffer细胞直接接触并行使负调功能的关键膜分子，并对其作用Kupffer细胞的分子机制进行抗体阻断的验证。同时将研究Treg细胞分泌细胞因子对Kupffer细胞的负调作用。

我们通过一系列的实验设计，证明了poly I:C/D-GalN诱导肝脏损伤的过程中Treg细胞发挥抑制作用，并且初步探讨了作用机制，基本上完成了项目设计时提出的问题。首先我们检测出poly I:C/D-GalN注射后Treg细胞的数量和比例在肝脏局部明显增加。为明确Treg细胞的功能，我们预先用抗体将CD25+细胞清除，清除CD25+Treg细胞后肝脏损伤明显加重；同时我们也使用缺失Treg细胞的Rag1-/-小鼠和野生型小鼠比较，Rag1-/-小鼠被注射poly I:C/D-GalN后肝脏损伤也较野生鼠加重。另一方面，我们通过细胞转输实验，将CD25+细胞或者EGFP+Foxp3+细胞转输给Rag1-/-小鼠和野生型小鼠，均能够减轻poly I:C/D-GalN诱导的肝脏损伤，充分证明了Treg细胞在poly I:C/D-GalN诱导肝脏损伤的过程中发挥抑制作用。因为清除Treg细胞后，TGF-β水平降低，我们进一步验证Treg细胞是否通过TGF-β发挥作用。给小鼠预先注射TGF-β中和抗体加重poly I:C/D-GalN诱导的肝脏损伤。为判断Treg细胞是否能够直接通过TGF-β影响天然免疫细胞的功能，我们将分离出来的Treg细胞和Kupffer细胞共同培养，加入TGF-β中和抗体可削弱Treg细胞抑制Kupffer分泌TNF-α的能力。TGF-β中和抗体同样能够削弱Treg细胞抑制以NK细胞为主要群体的Rag1-/-小鼠肝脏淋巴细胞分泌IFN-γ的能力。我们的研究首次在肝炎模型中揭示了Treg细胞对天然免疫细胞的负向调节和作用机制，为治疗肝脏损伤促进肝炎愈合提供了理论基础。该项目部分实验结果已整理发表在《中国免疫学杂志》2014年第1期上，其余结果投往《The journal of Europe immunology》。受该基金资助，我们有关NK细胞在日本血吸虫卵引起的肝脏纤维化中作用的研究已发表在第七届中国免疫学术大会论文集，做分会场报告，并且发表在 《Acta Tropic》 和《Plos Neglected Tropic Diseases》杂志上。