CD205+Kupffer细胞在HBV感染肝脏易发损伤中的作用及机制研究

Human infected with HBV are susceptible to liver injury induced by a variety of elements such as bacterium infection, but the actual mechanisms remain elusive. In our previous researches, we have demonstrated that CD205+Kupffer cells (KC) significantly increased in the liver of HBV transgenic mice. Compared with CD205-KC, CD205+KC produced more inflammatory cytokines when stimulated by CpG-DNA. We hypothesized that CD205+KC caused the susceptibility to hepatocyte injury-induced by bacteria-derived DNA in chronic HBV carriers. The aim of this present project is to define the key factors that CD205+KC used to mediate liver injury by analysis the origin, phenotype and function of CD205+KC and CD205-KC. Further, the critical signal pathways that induce inflammatory cytokine expression when CD205+KC are stimulated with bacteria-derived DNA will be detected. We try to identify new mechanisms underlining the susceptibility to hepatocyte injury in chronic HBV carriers and provide theoretical basis for developing novel KC-targeted drugs and therapies.

HBV感染者肝脏异常敏感，在细菌等刺激下易发损伤，但具体机制仍不清楚。我们前期研究发现HBV转基因小鼠肝脏中表达CD205的枯否细胞（KC）显著增加。和CD205-KC相比，CD205+KC在CpG-DNA刺激下分泌更多炎性因子。推测CD205+KC导致HBV感染者肝脏易受细菌DNA损伤。本课题拟比较CD205+KC和CD205-KC的表型和功能，判断CD205+KC的来源，寻找CD205+KC介导肝损伤的关键分子；并进一步探讨CD205+KC在细菌DNA刺激后分泌炎性细胞因子的关键信号通路。本项目旨在揭示HBV感染者肝脏易受损伤的新机制，并为以KC为调节靶点研制新的护肝药物和策略提供理论依据。

HBV感染者肝脏异常敏感，在细菌等刺激下易发损伤。HBV感染后，肠道微生物转位加剧，使更多的肠道细菌产物如DNA片段、LPS等通过门静脉进入肝脏。这些外周血中的微生物产物和患者肝脏损伤、纤维化程度密切相关，但具体机制仍不清楚。我们前期的研究发现HBV 转基因小鼠肝脏中表达CD205 分子的巨噬细胞显著增加；CD205+巨噬细胞能够分泌更多的炎性细胞因子。我们推测HBV 感染背景下产生的这群特殊的巨噬细胞可能是导致肝脏易受细菌产物损伤的“元凶”之一。.我们通过给HBV转基因鼠和B6鼠注射CpG-DNA，模拟肠道微生物转运加剧，发现HBV转基因鼠对CpG-DNA诱导的肝脏损伤更加敏感。进一步研究发现HBV转基因鼠肝脏巨噬细胞中CD205+亚群数量明显高于B6鼠，在受到CpG-DNA刺激后分泌大量IL-12激活NKT细胞，活化后的NKT通过杀伤分子FasL识别肝细胞表面的Fas介导肝细胞损伤。当我们用纳米材料包裹siRNA特异性干扰巨噬细胞表面的CD205分子后，肝脏损伤显著减轻，NKT细胞表达CD69、FasL的水平也降低。我们接着完成了HBV转基因鼠肝脏CD205+巨噬细胞表型和功能的鉴定，发现CD205+巨噬细胞表达高水平的CD14、CD80、CD86、CD40等共刺激分子；其炎性细胞因子（Tnfa, Il6, and Il12）、趋化因子（Cxcl2, Ccl2, Ccl3, Ccl4, and Ccl24）、吞噬相关基因（Cd5l, Macro, Gpnmb, Trem2, and Axl）的表达水平也明显高于CD205-巨噬细胞。另外，我们也在乙肝患者体内做了进一步的验证。我们发现乙肝表面抗原阳性者外周CD205+单核细胞较健康者明显增多，慢性乙肝患者肝脏内CD205+巨噬细胞较健康者也增多。进一步比较CD205+巨噬细胞和CD205-巨噬细胞，我们发现CD205+巨噬细胞表达CD14，CD16，HLA-DR等活化分子的水平更高，分泌IL-12、TNF-a等炎性细胞因子的水平也显著增加。我们的结果表明HBV感染微环境下肝脏中增多的 CD205+巨噬细胞处于活化状态，受到细菌DNA刺激后能分泌大量的炎性细胞因子，并且能够进一步激活NKT细胞，引发肝脏损伤。我们的结果为今后以CD205+巨噬细胞调节靶点治疗乙肝患者肝脏损伤提供了理论依据。