Treg细胞对Th1、Th2、Th17细胞介导的眼内炎症的调节作用

自身免疫性葡萄膜炎是由T细胞介导的眼内炎症，是常见的致盲性眼病之一。Th1、Th2、Th17均可分别介导眼内自身免疫反应，Treg是自身免疫反应中主要的调节细胞，对炎症细胞及细胞因子作用网络起调控作用，国外最新研究表明在自身免疫性胃炎中Treg对Th1介导的炎症抑制作用最强，对Th2介导的炎症抑制作用次之，对Th17介导的炎症抑制作用微弱。本课题拟在原有工作及国际最新研究成果基础上，采用流式细胞学、Realtime RT-PCR、ELISA及组织病理学研究Treg对Th1、Th2和Th17介导的眼内炎症中炎症细胞和细胞因子的调节作用及Th1、Th2和Th17对Treg的易感性，期望找到参与眼内自身免疫反应的主要炎症细胞和介导Treg调节作用的主要细胞因子，研究结果有助于进一步阐明Treg的作用机制及解决特异性靶向治疗问题，具有重要研究意义。本项目研究内容具有国内外创新性。

调节性Ｔ细胞（Treg）是体内免疫稳态的重要调节机制，与自身免疫性疾病的发病密切相关。根据分化方式的不同,Treg分为成熟于胸腺的nTreg(natural regulatory T cell)和在外周诱导的iTreg（induced Treg cell）。在体外增殖实验中，我们发现HEL特异性nTreg和用特异性抗原（HEL）+抗原呈递细胞（APC）诱导的iTreg（HA iTreg）可抑制Th1和Th17分化的传入相（afferent phase），而用抗CD3/CD28抗体诱导的iTreg（PbAb iTreg）则只能抑制Th17的传入相；对于Th1和Th17分化的传出相（efferent phase），nTreg对两者均无抑制作用，而HA iTreg和PbAb iTreg均只能抑制Th17。. 归巢行为和表型的稳定性是影响Treg功能的重要方面。我们用FACS比较了HA iTreg和PbAb iTreg与归巢相关的5个细胞粘附分子和9个趋化因子受体表达的差异。发现HA iTreg细胞α4β7，CD62L和CCR2表达量较高而PbAb iTreg细胞CXCR3，CXCR4 和CCR7表达量较高；两种细胞几乎100%的细胞表达CD103, LFA-1 和PSGL-1，4-11%的细胞表达CCR9, CCR4, CCR5和 CCR6，不表达CXCR6（＜1%）。我们还比较了8种趋化因子/趋化因子受体以及Foxp3 mRNA的表达,发现HA iTreg表达CXCL10, CXCL2, CCL2, CCL5, CCL22, CCR2, CXCR3更高，而PbAb iTreg表达CCL20及Foxp3较高 。此外，HA和PbAb iTreg在受体小鼠体内无抗原刺激的情况下不会增殖且有相似的表型稳定性（转移入体内7天后约1/3细胞丢失Foxp3表达）。. 本研究的体内实验采用了以下两种眼部炎症模型：1）将体外极化的HEL特异性效应T细胞（Th1）通过尾静脉过继转移至晶体表达HEL的受体转基因小鼠中（模拟继发性免疫应答）；或者2）将幼稚CD4+T细胞过继转移至受体小鼠，同时腹腔注射TLR 配体(PIC和LPS)（模拟原发性免疫应答）。实验发现，nTreg对第一种模型的眼部炎症无明显抑制作用，iTreg对第二种模型的眼部炎症也无明显抑制作用。