ω-3多不饱和脂肪酸对Kupffer细胞介导肝损伤的免疫调节作用及其机制研究

Immune-mediated liver injury is a major cause of many liver diseases. Activation of Kupffer cells by toxic agents results in the release of an array of inflammatory mediators, which plays a crucial role in liver injury. ω-3 polyunsaturated fatty acids (ω-3 PUFA) have significant immunomodulatory effects. However, the regulation mechanism of the protective effect of ω-3 PUFA on immune-mediated liver injury is unclear. This research will use mouse model of D-galactosamine/lipopolysaccharide (GalN/LPS)-induced liver injury. The protective effects of ω-3 PUFA on Kupffer cell-mediated liver injury will be investigated. Furthermore, in vitro, we will investigate the effect of ω-3 PUFA on cytokines released by Kupffer cells and the apoptosis or proliferation of Kupffer cell. In addition, we will investigate molecular mechanisms of protective effect of ω-3 PUFA on NF-κB, MAPK and JAK-STAT signal transduction pathway in the activation of Kupffer cells. This study will not only provide new theoretical mechanism of inflammatory immunomodulation of ω-3 PUFA, but also provide scientific basis and effective therapeutic strategies for prevention of immune-mediated liver injury.

免疫反应导致的肝损伤是许多肝脏疾病发病的重要因素，毒性物质激活Kupffer细胞释放大量的炎症介质在肝损伤中起至关重要的作用。ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3 PUFA）具有显著的免疫调节作用，但ω-3 PUFA保护免疫介导肝损伤的具体分子调控机制尚不清楚。本课题拟采用半乳糖胺/脂多糖（GalN/LPS）肝损伤小鼠模型，研究ω-3 PUFA对Kupffer细胞介导的肝损伤的保护作用；进一步通过体外实验系统地研究ω-3 PUFA对Kupffer细胞的细胞因子的释放及其对凋亡或增殖的影响；此外，通过研究ω-3 PUFA对Kupffer细胞介导的NF-κB、MAPK和JAK-STAT信号转导通路的影响来深入了解其作用的分子机制。本研究不仅为ω-3 PUFA的抗炎免疫调节提供新的理论机制，而且为免疫介导的肝损伤的有效防治提供科学的理论依据和安全有效的治疗策略。

免疫反应导致的肝损伤是许多肝脏疾病发病的重要因素，毒性物质激活Kupffer细胞释放大量的炎症介质在肝损伤中起至关重要的作用。ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3 PUFA）具有显著的免疫调节作用，但ω-3 PUFA保护免疫介导的肝损伤的具体分子调控机制尚不清楚。向C57BL/6野生型小鼠体内同时注射半乳糖胺/脂多糖（D-galactosamine/lipopolysaccharide, GalN（700 mg/kg）/LPS（10 μg/kg））构建免疫性肝损伤模型，GalN/LPS处理前DHA（100mg/kg）或EPA（100mg/kg）给与小鼠连续灌胃2周，GalN/LPS处理5 h后检测小鼠血清生化指标和肝脏组织病理，结果显示与GalN/LPS模型组比较，DHA和EPA单独预处理组小鼠血清的谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）的酶活性显著下降，肝细胞坏死程度和炎细胞的浸润以及单核/巨噬细胞渗入显著降低。ELISA实验结果显示GalN/LPS处理后小鼠血清的细胞因子包括肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的蛋白表达上升，DHA和EPA单独预处理后使这些蛋白表达有轻微下降。在体外实验中，定量PCR和ELISA结果显示DHA和EPA预处理使LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7的TNF-α的mRNA水平和IL-6的蛋白水平显著下降。蛋白免疫印迹实验表明DHA、EPA的处理对LPS刺激小鼠巨噬细胞产生炎症反应是通过抑制AGGF1蛋白表达调控的。本研究不仅为ω-3 PUFA的抗炎免疫调节提供新的理论机制，而且为免疫介导的肝损伤的有效防治提供科学的理论依据和安全有效的治疗策略。