HCV NS3/4A蛋白对细胞信号传导的影响及其在HCV感染慢性化及干扰素抵抗中的作用机制探讨

本研究拟通过在已建立HCV NS3/4A蛋白真核表达载体及HCV NS3/4A转基因鼠模型的基础上，了解NS3/4A蛋白对HCV转基因鼠I型干扰素信号通路及TNFα刺激后凋亡相关信号传导分子的影响，并进一步采用体外细胞转染技术及混合淋巴细胞培养方法，探讨HCV NS3/4A蛋白对正常人外周血单核细胞来源的树突状细胞（monocyte derived dendritic cells, MDDCs）相关信号传导途径的影响，进而了解可能由此引发的树突状细胞表面分子、T细胞增殖、细胞因子产生种类及水平的改变，分析NS3/4A蛋白在HCV逃避宿主免疫反应、感染慢性化以及干扰素抵抗中的可能机制。

本研究在已建立HCV NS3/4A蛋白真核表达载体及HCV NS3/4A转基因鼠模型的基础上，探讨了NS3/4A蛋白对HCV转基因鼠I型干扰素信号通路及TNFα刺激后凋亡相关信号传导分子的影响，结果发现，NS3/4A蛋白转基因鼠对致死量的TNFα具有明显的抵抗作用，而变异的mNS3/4A蛋白转基因鼠对致死量的TNFα不具有抵抗作用。给予致死量TNFα后，小鼠肝细胞中NFkB由细胞浆向细胞核内转位并逐渐增多，且NS3/4A蛋白转基因鼠肝细胞中NFkB的基线水平高于mNS3/4A蛋白转基因鼠和普通对照鼠，且给予TNFα后NFkB转位更为明显。caspase 3是一种诱导凋亡的效应信号分子，NS3/4A蛋白转基因鼠肝细胞中caspase 3的水平高于mNS3/4A蛋白转基因鼠和普通对照鼠。其它与TNF活化相关的信号分子，如IRF3 and p-p38MAPK 也有不同程度的改变。在此基础上，本研究对干扰素完全应答和无应答的慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞IL-28B/IFN-λ表达及变异状况进行了分析，探讨了IL-28B/IFN-λ多态性在临床不同病情，不同预后及不用干扰素治疗反应性中的作用，为临床不同病情，不同预后及不用干扰素治疗反应性的慢性HCV感染机制研究提供了依据，也为进一步寻找HCV感染的治疗靶位，开发更合理有效的治疗药物奠定了基础。此外，针对近年来慢性丙型肝炎治疗的重要进展，本研究还通过测序对中国人群HCVRNA NS3/4A核苷酸序列的多态性进行了分析，为即将用于临床的NS3/4A蛋白酶抑制剂的个体化应用奠定了基础。相关工作尚在总结过程中。