Tet-on-uPA转基因小鼠/人鼠嵌合肝的建立及其感染HBV的研究

实验动物模型的缺乏严重阻碍了人肝炎病毒感染的研究，故建立廉价易得的小动物模型是亟待解决的难题。能携带人肝组织的小鼠将为肝炎病毒感染研究提供良好的平台。研究表明，有效携带人肝组织的小鼠必须具备三个条件：①小鼠不排斥外源细胞；②移植前发生肝实质损害，造成肝再生需求；③小鼠肝细胞再生缺陷，不能自行完成肝再生。但迄今尚无完全符合上述条件的受体动物。uPA可致鼠肝细胞损害和再生缺陷，但持续表达uPA的小鼠不易存活。本项目将肝细胞特异性启动子Palb控制的uPA基因和tetO、tTRKRAB基因构建于同一个慢病毒载体，通过慢病毒载体感染法制备转基因小鼠，培育出可人为调控uPA基因表达从而符合上述条件的纯合子tet-on-uPA转基因SCID小鼠种系。用其构建人鼠嵌合肝并感染HBV，验证其支持人肝炎病毒感染的有效性。本项目的完成将为人肝炎病毒感染机制、抗病毒药物及毒理学等研究奠定可靠基础。

题 目：Tet-on-uPA转基因小鼠/人鼠嵌合肝的建立以及感染HBV的研究.实验动物模型的缺乏严重阻碍了人肝炎病毒感染的研究，故建立廉价易得的小动物模型是亟待解决的难题。能携带人肝组织的小鼠将为肝炎病毒感染研究提供良好的平台。2010年开始进行该项研究工作，历时三年。完成了大量的实验研究工作，总的来说是按照课题的要求，有计划、按时间完成了课题的研究工作，培养出了杂交小鼠。并申请了国家发明专利，发表了SCI文章。并在肝细胞的来源研究中课题得以扩展，由于间充质干细胞移植的发展迅速以及肝细胞移植的特点，促使我们采用了间充质干细胞诱导分化成肝细胞的方法。当然，课题进行中我们也遇到了杂交动物生长缓慢、生殖能力低下等困难。所以课题结题有所延后，但我们仍然会继续我们的已开创的研究工作。.计划研究任务和目标：1、以C57BL/6J小鼠肾脏为模板，扩增-uPA-基因片段。2、构建含-albumin-uPA-基因的慢病毒载体。.3、体外验证慢病毒感染肝细胞生物学功能。4、基因注射受精卵并植入排卵雌鼠卵巢。5、F0代转基因小鼠筛选（杂合子）。6、SCID转基因小鼠培育。.7、诱导-uPA-基因肝脏表达，肝细胞移植。8、肝细胞移植鼠感染HBV病毒。实际完成的任务，实现的目标：.1、以C57BL/6J小鼠肾脏为模板，扩增-uPA-基因片段。2、构建含-albumin-uPA-基因的慢病毒载体。3、体外验证慢病毒感染肝细胞生物学功能。.4、基因注射受精卵并植入排卵雌鼠卵巢。5、F0代转基因小鼠筛选（杂合子）。计划任务考核指标：.1、构建含-albumin-uPA-基因的慢病毒载体及体外验证慢病毒感染肝细胞生物学功能2、SCID转基因小鼠培育。3、诱导-uPA-基因肝脏表达，肝细胞移植.4、肝细胞移植鼠感染HBV病毒。实际完成的考核指标：1、构建含-albumin-uPA-基因的慢病毒载体及体外验证慢病毒感染肝细胞生物学功能.2、SCID转基因小鼠培育。取得成果：1、申请发明专利一项：PAlb-uPA慢病毒载体及其制备方法和应用（201210102188.1）发明专利. 作者：毛青、白家驷、李俊刚2、SCI 论文一篇. Constr