杆状病毒介导CTGF口服疫苗抑制实验性肝纤维化

结缔组织生长因子（CTGF）是一个新近发现的关键的促纤维化细胞因子，阻断CTGF可有效地抑制肝纤维化的发生发展。我们前期研究证实（1）将TGFβ1的一个中和性B细胞表位片段嵌合于乙肝核心抗原（HBc）的融合蛋白免疫小鼠后，可刺激小鼠产生抗TGFβ1抗体并抑制小鼠实验性肝纤维化；（2）表面展示有VSV-G的重组杆状病毒可有效感染小鼠肠黏膜细胞，介导外源基因表达，并刺激小鼠产生高效价抗体。本课题拟构建表达HBc-CTGF CT结构域嵌合基因的重组杆状病毒，作为CTGF口服疫苗；小鼠以重组杆状病毒灌胃后，检测嵌合蛋白在胃肠道内的表达及其刺激机体产生抗CTGF抗体的能力；细胞学实验验证产生的抗体对CTGF生物活性的中和能力；进而验证此CTGF口服疫苗对小鼠实验性肝纤维化的抑制作用。旨在为肝纤维化治疗探索新的手段，且研究结果可扩展至其它器官纤维化的防治领域。

1. 以原核表达方法制备了HBc-CTGF138-159重组嵌合蛋白，证实表达产物能自行装配为核衣壳样颗粒，以该重组蛋白免疫小鼠能刺激小鼠产生高滴度中和性抗体并能显著预防小鼠CCl4诱导的肝纤维化。论文（A virus-like particle–based connective tissue growth factor vaccine suppresses carbon tetrachloride - induced hepatic fibrosis in mice）已投《Vaccine》。2. 证实了携带CMV启动子的重组杆状病毒能介导外源基因在昆虫细胞sf9内有效表达。论文“Cytomegalovirus immediate-early promoter efficiently drives heterogeneous gene expression in Spodoptera frugiperda (Sf9) insect cells.”已被Cellular and Molecular Biology接收。3. 构建了表面展示有VSV-G，且能分泌表达目的蛋白的重组杆状病毒。初步证实了改建后的杆状病毒可介导外源基因在小鼠体内表达，并可刺激小鼠产生针对外源蛋白的抗体，但是外源基因表达水平及产生抗体的能力尚有待进一步改进。4. 证实重组蛋白Gremlin-1(159-170)-HBc能刺激小鼠产生Gremlin-1中和抗体并能预防小鼠CCl4诱导的肝纤维化。（西安交通大学学位论文《Gremlin 1重组疫苗的制备及其对小鼠实验性肝纤维化的抑制作用》，2013）。5. 制备了TGFβ1和PDGF-B kinoid疫苗并证实了其抑制肝纤维化的作用。论文已发表（Vaccination with Platelet-Derived Growth Factor B Kinoids Inhibits CCl4-Induced Hepatic Fibrosis in Mice. J Pharmacol Exp Ther 2012; 342:835-842. Attenuation of CCl4-induced hepatic fibrosis in mice by vaccinating against TGF-β1. PLOS ONE, 2013; 8: e82190.）