2型糖尿病合并脂肪肝的内质网应激调控机制及基于"虚、毒、瘀"论治中药的干预研究

2型糖尿病（T2DM）合并脂肪肝（NAFLD）是目前医学界日益关注的重大课题，而机体胰岛素抵抗，肝细胞脂肪合成增加与输出减少是其形成的重要环节。近期研究表明，内质网应激（ERS）是联系外周IR、T2DM、脂肪肝和AS的纽带，而国内外研究对ERS在T2DM合并NAFLD进展中的机制尚不明确。我们前期研究显示：高脂饮食转基因2型糖尿病MKR鼠更易形成脂肪肝，且其肝细胞ERS标志分子表达升高，提示ERS在T2DM并发NAFLD进程中扮演了重要角色。本课题拟以高脂饮食转基因MKR鼠和体外高油酸培养肝细胞为研究对象，系统探讨ERS在肝细胞脂肪性变中的分子机制，以及T2DM合并NAFLD的"虚、毒、瘀"病机是否与其具有相关性；并以滋阴益气、清热利湿、化痰消瘀立法的中药复方干预进行反证。旨在丰富糖尿病并发症"虚、毒、瘀"病机的科学内涵，并为T2DM合并NAFLD临床诊断提供科学依据，为其治疗寻找新靶点。

2型糖尿病（T2DM）合并脂肪肝（NAFLD）是目前医学界日益关注的重大课题，而机体胰岛素抵抗，肝细胞脂肪合成增加与输出减少是其形成的重要环节。近期研究表明，内质网应激（ERS）是联系外周IR、T2DM、脂肪肝和AS的纽带，而国内外研究对ERS在T2DM合并NAFLD进展中的机制尚不明确。本项目以高脂饮食MKR鼠和体外高油酸培养肝细胞为研究对象，分别从体内、体外实验两方面，采用光镜、电镜、ELISA、RT-PCR、Western Blotting和免疫组化等技术，探讨ERS在2型糖尿病（T2DM）合并脂肪肝（NAFLD）肝细胞脂肪性变中的分子机制，以及T2DM合并NAFLD的“虚、毒、瘀”病机是否与其具有相关性；并以滋阴益气、清热利湿、化痰消瘀立法的中药复方干预进行反证。结果表明，（1）光镜和电镜下可见高脂饮食MKR鼠肝细胞脂质堆积，高脂饮食MKR鼠空腹血糖、肝组织脂质（TG、FFA）含量均较对照组明显升高（p <0.05），糖耐量异常（p <0.05），肝脏内质应激和脂代谢相关基因mRNA表达异常增加，其中GRP78、XBP1、CHOP、SREBP1c 、FAS、ACC-α、GSK3β 和EDEM1 mRNA及蛋白表达水平均显著增加，差异具有统计学意义（P<0.01），而apoB100 mRNA表达水平显著降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。左归降糖清肝方能改善糖耐量（p <0.05）、改善高脂MKR鼠肝脂质TG、FFA水平（p <0.05），内质网应激相关基因GRP78、XBP1、CHOP、SREBP1c 、FAS、ACC-α、GSK3β和EDEM1 mRNA及蛋白表达水平均显著下降，差异具有统计学意义（P<0.01），而apoB100 mRNA表达水平显著升高，差异具有统计学意义（P<0.01）。（2）0.5 mmoL/L 混合脂肪酸孵育HepG2细胞24 h，可诱导细胞内TG大量沉积，HepG2细胞GRP78、XBP1、FAS、ACC-α、GSK3β、CHOP、SREBP1c和EDEM1&nbsp;mRNA和蛋白表达水平有升高趋势，差异具有统计学意义（P<0.05）。15% 左归降糖清肝方含药血清可干预混合脂肪酸这一效应, 使细胞内的TG含量明显下降(P＜0.01)，其机制与调节ERS相关。