采用定量蛋白质组学技术筛选鼻咽癌化疗耐药相关甲基化失活基因

为揭示基因甲基化失活与鼻咽癌化疗耐药的关系，为临床合理用药提供理论依据，项目首先采用浓度递增和药物大剂量冲击相结合的方法建立稳定的耐顺铂人鼻咽癌耐药细胞系CNE1-DDP和CNE2-DDP，然后采用定量蛋白质组学技术(2D-DIGE结合质谱)和DNA甲基化检测技术，从全基因组范围筛选与鼻咽癌耐药相关甲基化失活基因。再以初诊NPC患者的病理活检组织和血液为样本，分析临床样本中与NPC耐药相关的甲基化失活基因的甲基化情况，随访观察分析与鼻咽癌化疗耐药相关的甲基化失活基因与临床发生耐药的关系，揭示这些甲基化失活基因在NPC耐药中的作用，寻找NPC化疗耐药临床标志物。项目研究结果不仅建立了稳定的耐顺铂鼻咽癌细胞系模型，而且为临床预测耐药提供生物标志物，为鼻咽癌治疗用药提供重要的理论依据，也可为提高鼻咽癌及其他恶性肿瘤治疗效果开辟新的思路，具有重要的理论意义和实际应用价值。

为揭示基因甲基化失活与鼻咽癌化疗耐药的关系,项目首先采用浓度递增的方法建立稳定的耐顺铂人鼻咽癌耐药细胞系CNE1-DDP和CNE2-DDP，然后采用定量蛋白质组学技术(iTRAQ结合质谱)从全基因组范围筛选与鼻咽癌耐药相关甲基化失活基因。三次质谱共鉴定非冗余蛋白817个，其中754个蛋白鉴定了两个或两个以上肽段，共筛选出差异蛋白184个，GO分析显示这些差异蛋白主要与细胞的生理过程、代谢、生物学过程的调节、细胞信息交换、细胞周期等相关，KEGG信号通路分析显示差异蛋白主要涉及核糖体、蛋白酶体、粘着、嘧啶代谢、碱基切除修复、嘌呤代谢，胰岛素信号转导通路等信号通路，此外，从PPI中可以看出位于结点处的蛋白主要为一些结合蛋白，还有部分与高尔基体的分泌相关，部分蛋白参与DNA的修复和细胞周期、也与炎症相关。上述结果初步证实了这些差异蛋白可能是鼻咽癌化疗耐药相关的甲基化失活基因（蛋白），但还需进一步的验证及功能分析。