甜菜黑色焦枯病毒卫星RNA与复制酶结合的关键区域定位

卫星RNA依赖于辅助病毒方能进行复制，并在许多植物病毒与寄主的相互作用中发挥重要作用，但目前尚无关于卫星RNA如何对辅助病毒复制酶（RNA dependent RNA polymerase, RdRp）进行识别、结合的研究报道。本研究将在已有工作的基础上，以在我国首先发现的甜菜黑色焦枯病毒（Beet black scorch virus, BBSV）卫星RNA为材料，对BBSV RdRp如何识别卫星RNA并支持其有效复制进行深入的研究。拟通过将复制能力发生变化的各种卫星RNA突变体分别与RdRp进行体外结合，分析各突变位点对RdRp识别结合能力的影响，并对卫星RNA中与RdRp结合的关键区域进行精确定位。所获得的结果将有助于认识辅助病毒如何支持卫星RNA的复制，进而了解卫星RNA参与病毒-寄主复杂互作体系的机制。

所有已知的植物病毒卫星RNA（sat-RNA）均依赖辅助病毒才能被有效复制，目前关于辅助病毒的复制酶（RdRp）如何与sat-RNA相互作用的信息仍非常有限。本研究以甜菜黑色焦枯病毒（Beet black scorch virus, BBSV）sat-RNA为材料，对BBSV RdRp 如何识别sat-RNA 并支持其有效复制进行深入的研究，并尝试解析BBSV/sat-RNA共侵染本生烟后，sat-RNA上出现siRNA降解热点的原因。首先通过原核表达纯化出有活性的RdRp（P82），凝胶阻滞（EMSA）检测结果表明纯化的P82能够正常结合sat-RNA，并且sat-RNA突变后，P82对突变的sat-RNA的结合能力要弱于野生型sat-RNA，以上结果与BBSV不能够有效的带动突变的sat-RNA进行复制相一致；此外，我们的结果证明sat-RNA上产生siRNA的热点区域不依赖于沉默通路中RdR6基因，而主要与辅助病毒BBSV的存在相关，以上结果表明BBSV RdRp不仅是维持sat-RNA活性所必需，还暗示着RdRp-sat-RNA的互作与sat-RNA来源的siRNA基因组分布特点存在着相关性，这为更全面的理解辅助病毒与sat-RNA的互作提供了有价值的信息。