间变性淋巴瘤激酶ALK融合蛋白在食管鳞癌中作用机制的研究及其靶向药物对食管鳞癌治疗效果的检测

间变性淋巴瘤激酶（ALK）是一种受体酪氨酸激酶，正常情况下只表达于新生儿的神经系统。基因异位导致ALK的胞内激酶区和其他基因5'端融合，启动了ALK融合基因的表达，激活了ALK的活性，在多种肿瘤发挥癌基因作用。ALK小分子抑制剂对部分肺癌和炎性肌纤维母细胞瘤的显著疗效表明，ALK是一种有效的治疗靶点。食管癌中也发现了ALK融合蛋白的表达，是潜在的靶向治疗位点。本研究将在300例食管鳞癌组织中检测ALK高表达率，并确定ALK融合基因的类型，分析ALK高表达对食管鳞癌细胞活性的影响。在此基础上，检测已发现的5种有活性ALK小分子抑制剂对高表达ALK的食管鳞癌细胞的生长抑制作用，确定其中有效的靶向药物。进一步在原代食管鳞癌裸鼠移植模型中验证ALK靶向药物的治疗效果，为进行临床试验奠定基础。本研究有效结合了国际研究热点和我国特发肿瘤，对发现食管鳞癌的治疗靶点，寻找有效的靶向治疗药物具有重要意义。

间变性淋巴瘤激酶（ALK）是一种受体酪氨酸激酶，正常情况下只表达于新生儿的神经系统。基因重排导致ALK的胞内激酶区和其他基因5'端融合，激活了ALK基因的表达和活性，在多种肿中发挥癌基因作用。ALK小分子抑制剂对部分肺癌和炎性肌纤维母细胞瘤的显著疗效表明，ALK是一个有效的治疗靶点。蛋白质组学研究报道了食管鳞癌中的ALK融合蛋白的表达，提示ALK是食管鳞癌潜在的靶向治疗位点。本研究原计划在约300例食管鳞癌组织中检测ALK表达水平，并确定ALK融合基因的类型，分析ALK高表达对食管鳞癌细胞活性的影响。在此基础上，检测已发现的5种有活性ALK小分子抑制剂对高表达ALK的食管鳞癌细胞的生长抑制作用。课题实施后，我们首先利用免疫组化法检测了370食管鳞癌石蜡组织中ALK表达水平，利用FISH法检测了300例石蜡组织中ALK基因，结果均未发现ALK在食管鳞癌组织中存在融合或高表达。我们的119例食管鳞癌全外显子组测序数据也未发现ALK基因融合。这表明食管鳞癌中存在ALK融合基因的可能性很小，不适合作为药物靶点进行后续研究。随后，我们利用二代测序技术，对15例食管鳞癌组织和3个食管鳞癌细胞系进行了RNA序列分析，分析共发现了163个融合基因，并发现了WDR34-SET是食管鳞癌中频发的融合基因。为研究针对融合基因进行食管鳞癌靶向治疗提供了重要依据。我们还针对癌症中新发现的治疗靶点EZH2，检测了8种EZH2小分子抑制剂对食管鳞癌细胞增殖的抑制活性。发现了EZH2小分子抑制剂UNC1999对食管鳞癌细胞具有较强的抑制活性，为后续开展深入药效研究提供基础。