食管癌细胞中c-myc对miRNA-29c转录的调节及miRNA-29c抑癌作用机制的研究

本课题组前期的研究结果发现miRNA-29c在食管鳞癌的发生和发展中可能是一个重要的抑癌基因。本课题将在食管鳞癌组织和细胞系中检测miRNA-29c的表达水平，并研究其表达水平改变后对食管鳞癌细胞系增值、转移和侵袭等生物学行为的影响。研究在食管鳞癌细胞中c-myc对miRNA-29c前体的转录调节作用。进一步利用生物信息学和mRNA表达谱芯片筛选受miRNA-29c调控的下游靶基因。并且在食管鳞癌细胞中深入研究miRNA-29c对其靶基因的表达水平的调节，以及其靶基因介导miRNA-29c抑癌功能的作用机制。对于揭示miRNA-29c在食管癌发生发展中的作用机制具有重要的科学意义；对于最终将miRNA-29c应用于食管鳞癌的临床诊断、预测转移风险以及可能进行的靶向治疗具有重要的意义。

食管癌是一种常见的恶性肿瘤，在世界范围内的发病率和死亡率分别排在第8位和第6位。我国食管癌发病率居世界首位，近年来其发病率虽然有所下降，但死亡率变化不大，术后五年的生存率只有20-30％。食管癌的发生发展是一个多阶段，多种分子参与的复杂过程。然而，这些分子是如何调控食管癌的起始和进展，以及如何利用这些分子进行靶向治疗仍然需要进一步探索。miRNAs是长度为19-22nt、高度保守的非编码RNA，并且能够通过转录后调控的机制抑制靶基因的翻译。miRNAs在细胞增殖，分化和凋亡过程中起到了重要的作用。最近越来越多的证据显示miRNAs在肿瘤的发生和发展中起到了重要的作用。已有大量证据显示某些miRNAs的异常表达可能导致肿瘤的发生，并且在多种肿瘤中已经发现miR-29c低表达的现象。然而，miR-29c低表达在食管癌中所发挥的作用仍然不清楚。在我们的研究中证明miR-29c在食管癌组织和细胞中明显低表达，并且能够在体内和体外抑制食管癌细胞的增殖。我们通过双荧光素酶报告基因实验证明cyclin E是miR-29c的靶基因。众所周知，cyclin E是细胞周期G1/S期过渡的重要分子，并且其在食管癌的发生过程中频繁的高表达。实验结果证明在食管癌细胞中miR-29c和cyclin E的表达水平呈负相关。同时，过表达miR-29c能够抑制cyclin E的表达，并且随着miR-29c前体分子转染剂量的增加而cyclin E的表达降低。此外，我们还发现miR-29c过表达能够诱导细胞周期G1/S期阻滞并且抑制Rb蛋白的磷酸化。这些结果暗示miR-29c可能是通过cyclin E/Cdk2-pRb信号通路实现的诱导细胞周期G1/S期阻滞。我们还检测其它的G1期相关蛋白的表达水平如cyclin D1、cyclin D2、CDK2、CDK6，结果证实miR-29c不影响这些蛋白的表达。因此，我们可以得出miR-29c在食管癌细胞中主要通过调控cyclin E的表达诱导细胞周期G1/S期阻滞。综上所述，我们的研究证明miR-29c能够抑制cyclin E的表达，并且在食管癌的发生中起到抑癌分子的作用。