EMMPRIN在动脉粥样硬化易损斑块中的作用及机制研究

稳定动脉粥样硬化易损斑块是防治心肌梗死的关键。新近，本课题组发现基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN可高表达于巨噬细胞表面及APOE缺陷小鼠动脉粥样斑块内，并参与巨噬细胞活化、RAS系统通路及基质金属蛋白酶MMPs表达的调控过程；据此，我们分析EMMPRIN可多途径影响易损斑块的稳定性，能够作为易损斑块检测和治疗的新靶标，目前国内外对此尚无报道。本项目以上述研究进展为基础，拟通过分析EMMPRIN与多型临床冠心病患者冠状动脉斑块类型之间的关系为先导；继而采用EMMPRIN单克隆抗体和RNAi法处理APOE缺陷小鼠动脉粥样硬化模型，分析其斑块稳定性的变化；最后以体外实验从巨噬-泡沫细胞演化、多种活性细胞MMPs表达及炎症通路调控三方面探讨EMMPRIN稳定易损斑块的机制。力求深入揭示EMMPRIN在动脉粥样硬化过程中的生物学作用，可望为EMMPRIN靶向稳定易损斑块治疗提供理论依据。

尽早识别和稳定动脉粥样硬化易损斑块是降低心肌梗死发生的关键，本课题在前期研究基础上针对EMMPRIN与易损斑块的关系进行了深入研究：1. 临床研究表明冠心病患者冠状动脉粥样斑块类型与EMMPRIN之间密切相关：对冠心病患者行64层螺旋CT冠状动脉成像，分为软斑块、纤维斑块和钙化斑块，采用流式细胞仪检测外周血单核细胞和血小板表面EMMPRIN、GPⅥ表达，ELISA法检测血中uPA、P-选择素浓度，结果发现冠心病组EMMPRIN、GPⅥ表达和uPA、P-选择素水平明显升高(P<O.05)；血小板表面EMMPRIN表达水平与冠心病类型关系密切，冠心病组血小板表面 EMMPRIN、GPⅥ表达水平较对照组升高，且急性冠脉综合征组较稳定性心绞痛组升高更明显（P<0.05）；软斑块、纤维斑块组较钙化斑块组升高，软斑块组又较纤维斑块组明显升高(P<0.05）。2.在体动物实验发现EMMPRIN与动脉易损斑块稳定性相关：培养APOE-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型，用油红O染色、免疫组化观察主动脉斑块的变化，运用WB检测主动脉内EMMPRIN蛋白表达，显示EMMPRIN在apoE缺陷小鼠高脂喂养8周左右与动脉粥样硬化同步升高；在高脂喂养同时+EMMPRIN单克隆抗体干预，小鼠主动脉EMMPRIN的蛋白表达下降，同时动脉粥样硬化负荷明显减轻，血脂沉积减少，动脉斑块内巨噬细胞含量减少，而血管平滑肌细胞及胶原含量增加，使斑块趋于稳定；同时发现，EMMPRIN单克隆抗体降低了apoE-/-小鼠血清中IL-6、MCP-1的含量。3.离体细胞实验发现抑制EMMPRIN和过表达EMMPRIN可影响Akt/mTOR通路的活化：制备腺病毒，导入EMMPRIN，培养巨噬细胞并对其进行转染，发现抑制EMMPRIN的表达后，Akt，mTOR磷酸化明显受到抑制；过表达EMMPRIN后，Akt，mTOR磷酸化增强。ox-LDL刺激巨噬细胞，EMMPRIN，PEG2，COX-2在12小时达高峰。使用阿托伐他汀，COX-2阻断剂，PEG2等干预，显示阿托伐他汀可明显减轻oxLDL刺激引起的EMMPRIN，PEG2，COX-2的增高，而PEG2和COX-2阻断剂则可逆转阿托伐他汀的这一作用。.本课题揭示了EMMPRIN 可能是动脉粥样硬化斑块不稳定的关键分子,EMMPRIN可能成为动脉硬化易损斑块防治的靶标。