泛素交联酶RAD6在DNA损伤修复和肿瘤发生中作用的研究

参与DNA损伤修复的蛋白会被招募到损伤位点聚集被称为foci。泛素交联酶(E2)形成的foci是短暂和微弱的，常规方法观察不到。本人在实验中摸索出了一种新方法可以观察到E2的foci，通过这一方法我们观察到了RAD6的foci，首次发现了RAD6和RNF168作为相互作用的泛素交联酶和泛素连接酶共同定位于DNA损伤位点。更有趣的是我们发现了射线照射后RAD6基因缺失细胞内BRCA1和53BP1的foci减少，说明RAD6参与了DNA损伤反应BRCA1这条通路并可能和肿瘤发生有关。本项目拟进一步探讨RAD6在这一通路中的位置和作用;明确RAD6与RNF168的作用底物和该底物的泛素化位点；明确RAD6在DNA损伤后细胞周期调控中的作用。通过对RAD6基因敲除小鼠的观察明确RAD6在肿瘤发生过程中的作用。

我们通过共转染泛素交联酶E2和泛素连接酶E3的新方法观察到了泛素交联酶RAD6在DNA损伤位点的聚集(foci)，首次发现了RAD6和RNF168作为相互作用的泛素交联酶和泛素连接酶共同定位于DNA损伤位点。我们发现了射线照射后RAD6基因缺失细胞内BRCA1和53BP1的foci减少，说明RAD6参与了DNA损伤反应BRCA1这条通路并可能和肿瘤发生有关。本项目我课题组研究了RAD6在DNA损伤修复通路中的位置和作用;发现了RAD6在DNA损伤修复通路中通过泛素化组蛋白H1.2传导DNA损伤修复信息，参与修复反应。并且发现RAD6在DNA损伤后细胞周期调控中发挥作用。通过对RAD6基因敲除小鼠的观察了RAD6在肿瘤发生过程中的作用，只发现KO小鼠偶发肿瘤，从目前得到的数据分析肿瘤发生没有统计学意义，尚不能说明RAD6基因敲除小鼠自发肿瘤发生率高于对照。通过MNU诱导膀胱癌发现KO小鼠MNU诱导肿瘤发生率高于对照。