miR-2861对血管平滑肌细胞成骨分化的影响及机理研究

血管平滑肌细胞（VSMCs）成骨分化是血管钙化的细胞学基础。我们新克隆的一个具有促成骨作用的miR-2861高表达于钙化的血管组织，提示其可能与血管钙化相关。本课题采用钙化型血管细胞（CVCs）和经β-甘油磷酸钠诱导的VSMCs两种细胞模型，观察miR-2861对其成骨分化的影响，验证miR-2861下调其靶基因HDAC5表达从而抑制Runx2蛋白降解的作用，并探讨Runx2是否可以通过结合miR-2861启动子区的互补序列（5′-ACCACA-3′）激活miR-2861转录。并注射antagomiR-2861建立miR-2861缺失小鼠模型观察其在体内对血管钙化的影响。本课题旨在探讨是否存在miR-2861、HDAC5和Runx2组成自动调节正反馈环路促进血管平滑肌细胞成骨分化，从而发生血管钙化的新机制，为其防治拓展新思路。

我们前期克隆了两个成骨细胞特异性表达的miRNA分子miR-2861和miR-3960，它们在基因组中成簇存在，共同转录。miR-2861/miR-3960表达簇与转录因子Runx2形成成骨细胞分化的正反馈调控环路。此课题进一步研究它们对血管平滑肌细胞成骨分化的作用。MiR-2861或miR-3960过表达促进β-甘油磷酸钠诱导的血管平滑肌细胞成骨分化过程中的ALP活性和OC分泌，并增加Runx2蛋白的表达。抑制MiR-2861或miR-3960的作用降低了血管平滑肌细胞成骨分化过程中的ALP活性及OC分泌，并抑制Runx2蛋白的表达。转染miR-2861或miR-3960表达载体的血管平滑肌细胞HDAC5或Hoxa2蛋白水平下降，但HDAC5或Hoxa2 mRNA表达无明显变化。转染Runx2表达载体的血管平滑肌细胞中，miR-2861与miR-3960的表达增强。而转染siRNA-Runx2的β-甘油磷酸钠诱导的血管平滑肌细胞miR-2861与miR-3960的表达降低。注射antagomiR-2861 或antigomiR-3960减轻了活性维生素D诱导的小鼠动脉钙化。综上所述，MiR-3960/miR-2861/Runx2正反馈调控环路参与血管平滑肌细胞成骨分化，从而调控血管钙化。调控血管平滑肌细胞中miR-2861/miR-3960/Runx2环路可能成为血管钙化新的治疗手段。