HBx驱动肝细胞甲胎蛋白基因表达及调控PI3K/AKT信号传递的作用机制

乙型肝炎病毒（HBV）-x蛋白(HBx)是诱发肝癌的重要病毒因子，但HBx并不能直接驱动肝细胞恶性转化，PI3K/AKT信号被激活是细胞恶性转化的重要标志，近期研究表明HBx能诱导甲胎蛋白（AFP）的表达，而我们研究发现AFP具有促肝癌细胞PI3K/AKT信号传递的生物学功能，由于AFP高表达是肝癌发生的早期基因事件，所以我们推测HBx可能通过驱动AFP表达从而激活PI3K/AKT信号。本项目采用ChIP、RNA干扰和特异性甲基化-PCR等技术，研究HBx驱动肝细胞AFP基因表达的表观遗传效应，以及AFP对HBx激发PI3K/AKT信号传递的影响及其作用机制：1、HBx驱动AFP基因表达的表观遗传机制；2、AFP与PTEN相互作用及调控Src、Ras和CXCR4表达；3、AFP对肝细胞恶性转化的影响。本项目的研究可探索HBV激活肝细胞PI3K/AKT信号机制和预警病毒性肝癌发生有重大意义。

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）-x（HBx）蛋白能促进肝细胞的恶性转化，在肝癌发生的早期甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）的基因重新被激活而表达, 所以AFP作为肝癌发生的诊断标志物。研究已经发现，AFP能通过激活生长信号促进肝癌细胞的恶性行为，但是HBx是否能驱动AFP表达，以及AFP是否能激活PI3K/AKT信号促进肝细胞的恶性转化，目前还不清楚。本项目采用免疫组织化学、Western blotting、RNA干扰、染色体免疫共沉淀、激光共聚焦显微镜、染色体免疫共沉淀、小动物活体成像、荧光共振能量转移等技术，从临床肝癌样本、体外细胞系研究HBx对正常肝细胞AFP表达的影响，并分析AFP表达后对PI3K/AKT信号的激活作用，探索HBx驱动AFP表达后对肝细胞恶性转化的影响。研究结果显示，（1）在肝细胞的恶性转化进程中，AFP、AFP受体（AFPR）、Src、Ras、CXCR4等基因的表达不断增强；AFP和AFPR优先于Src、Ras等癌蛋白的表达；（2）HBx能促进正常肝细胞表达AFP和AFPR，而且对AFP和AFPR基因表达有优先的选择性；（3）HBx诱导正常人肝细胞L-02的AFP和AFPR表达后，AFP定位于肝细胞浆，而AFPR则定位于细胞膜；（4）在人肝癌PLC/PRL/5细胞有AFPR表达。用AFP作用于这些细胞，能促进这些细胞的Src表达，用Ly294002（PI3K特异性阻断剂）处理细胞能显著性阻断AFP诱导Src表达；（5）HBx优先驱动AFP表达，激活PI3K/AKT信号途径诱导肝细胞的恶性转化。项目的研究结论是，HBx优先驱动AFP表达；AFP具有激活PI3K/AKT信号通路的生物学功能，并通过激活该途径促进肝细胞的恶性转化。AFP可作为生物治疗肝癌的新的靶分子。