AFP受体表达对HBx诱导肝细胞恶性转化的预警作用及靶向示踪癌细胞转移的实验研究

Alpha fetoprotein(AFP) receptor(AFPR) and AFP were important biomarkers of malignant transformation of liver cells.Previously,Our results had found two affinity constants AFPR exsited in the membrane of hepatocellular carcinoma cells(HCC).Documents indicated hepatitis virus B x (HBx) protein induced liver cells malignant transformation through activating PI3K/AKT signal pathway, and cancer cells obtained metastatic character in early stage during carcinogenesis. AFPRs exsited in the membrane of HCC possessed specificity, therefore targeted imaging AFPRs may reveal the tiny nidus of HCC metastasis. Although HBx has a function to drive AFPRs expressed and malignant transformation of liver cells,the mechansim still uncertain.Presently,developed image the tiny metastsis nidus of HCC is a vital scientific issue in the field of caner therapy.This projects aim to investigate: 1.Explored mechansim of HBx driving liver cells AFPR expressed through activating PI3K/AKT signal pathway,demonstrated AFPR function as biomarker for early warning hepatocarcinogenesis and target imaging AFPR may indicate the exsit of HCC cells in vitro; 2. Target imaging AFPR to trace the location and metastasis of HCC cells in vivo.This research may reveal molecular mechansim of HBx stress to stimulate AFPR gene expressed in liver cells, and AFPR was a biomarker for tracing the metastasis of HCC cells;This project provide a new strategy for finding tiny location and precision eliminate of HCC.

甲胎蛋白（AFP）受体（AFPR）和AFP的表达是肝细胞恶性转化的重要标志。我们前期研究发现在人肝癌细胞膜表面存在两种不同亲和常数的AFPR；乙型肝炎病毒可通过-X蛋白（HBx）激活PI3K/AKT信号途径诱导肝细胞恶变，在肝细胞恶性转化的早期已伴有癌细胞转移，因为AFPR存在于肝癌细胞膜表面，所以靶向标记AFPR能显示肝癌细胞转移的位置。HBx诱导肝细胞AFPR表达的机制不清楚，而且显示肝癌细胞转移的微小病灶是目前还没有解决的重大科学问题。所以本项目通过以下方式研究HBx诱导肝细胞恶变和靶向示踪癌细胞转移：1、体外研究HBx激活PI3K/AKT信号途径诱导肝细胞AFPR表达的恶性转化机制及AFPR对癌细胞转移的显影作用；2、体内靶向标记AFPR示踪肝癌细胞转移的定位。本项目可探索AFPR表达预警HBx诱导肝细胞恶性转化的分子机制，对靶向显影肝癌细胞的转移和精准清除癌细胞有重要的科学意义。

乙型肝炎病毒（HBV）能促进肝细胞恶性转化，而HBV-x蛋白（HBx）是诱导肝癌发生的关键分子。肝癌发生早期，HBx诱导甲胎蛋白（AFP）表达，AFP通过受体介导或在胞浆内激活生长信号的传递，促进肝细胞恶性转化，所以在临床上利用AFP预测肝癌发生，但是AFP受体（AFPR）是否能预警肝癌发生，目前还不清楚。本项目通过检测HBV-相关肝癌标本，以及用HBx诱导正常人肝细胞恶性转化过程，观察AFPR表达的改变，研究AFPR介导的肝细胞恶性转化以及对肝癌细胞转移的示踪作用。研究结果显示，在肝癌组织的肝癌细胞膜表面有AFPR存在；在人肝癌细胞膜表面有AFPR表达；AFPR能介导细胞外的AFP发挥其促进肝癌细胞的恶性行为的作用，发现AFPR介导的信号也能激活PI3K/AKT信号途径。肝癌细胞的胞浆内AFP对肝癌的形成和癌细胞的恶性生长具有正性调节作用，其能通过抑制凋亡信号的传递和激活生长信号对抗凋亡因子的诱导作用。结构生物学研究发现，AFP能与PTEN结合，研究发现AFP具有抑制PTEN活性的生物学功能，也就是AFP能激活PI3K/AKT信号传递。研究发现乙型肝炎病毒-X蛋白（HBx）能优先诱导人正常肝细胞L-02和CHL的AFP和AFPR表达。AFP和AFPR的表达早于其它癌基因和转移相关基因的表达，证明AFP在诱导肝细胞恶性转化过程中起“先锋因子”的作用；发现AFP具有诱导肝细胞重编程因子Oct4、Klf4、Sox2和c-myc等因子的表达。AFP通过激活PI3K/AKT信号，促进肝癌干细胞的生成。小动物实验研究表明,利用AFP和AFPR特异性结合的特性，可示踪肝癌细胞的转移。本项目研究不仅发现AFPR能预警肝癌发生，而且发现AFPR能示踪肝癌细胞的转移，同时发现，AFP具有促进肝细胞自然重编程作用，对利用AFPR预警肝癌发生，以及发现微小的肝癌细胞转移病灶，彻底清除肝癌细胞具有重大的科学意义和实用价值。