AGEs-RAGE信号通路在糖尿病性溃疡创面组织中的表达及MEBO的干预研究

Diabetic ulcer is one of the serious compliactions of dibetes. It is easy to diagnose but hard to be cured.With unclear patheogensis, diabetic ulcer is regarded to be closely related with abnormal accumulation of AGEs in skin tissure, especially with AGEs-RAGE signal transduction pathway which plays a key role on wound healing.while few researches about the expression and mechanism of AGEs in Diabetic Ulcer were reported. We suspect that AGEs-RAGE signal transduction pathway plays a key role on wound healing.This program took AGEs-RAGE signal transduction pathway as a starting point,established the diabetic ulcer model on the diabetic rats and applied ELISA, Western Blot, RT-PCR and immunohistochemistry to explain how MEBO treament promote wound healing of diabetic ulcer from the the prospetive of molecular and cellular signal transduction, providing a new research method and basis for the TCM theory of eliminating necrotic tissues,promoting granulation and strength the vital to prevent and cure the diabetic ulcer.

糖尿病性溃疡是糖尿病严重的并发症之一，临床上易诊断难治疗，其发病机制尚不明确，有研究表明该病的发生可能与其创面组织中晚期糖基化终末产物(AGEs)的异常蓄积密切相关，但AGEs在糖尿病性溃疡组织中的表达情况及其在糖尿病性溃疡发病中的具体作用机制尚未见报道，我们推测AGEs-RAGE信号转导通路在其愈合过程中可能发挥关键作用。本项目以AGEs为切入点，通过建立糖尿病大鼠溃疡模型，应用ELISA、Western Blot、RT-PCR及免疫组化等先进技术，明确AGEs及其信号转导通路在糖尿病性溃疡创面愈合过程中的表达，阐明其具体作用机制，并通过湿润烧伤膏（MEBO）的干预研究，探讨MEBO促进糖尿病性溃疡创面修复及组织再生的药物作用靶点，为中医药"祛瘀生肌、扶正补虚"防治糖尿病性溃疡提供理论依据和可资借鉴的研究思路。

糖尿病性溃疡是糖尿病严重的并发症之一，其发病机制与其创面组织中晚期糖基化终末产物(AGEs)的异常蓄积密切相关，但AGEs-RAGE信号通路在糖尿病性溃疡发病中的具体作用机制尚不甚明确。本项目研究建立了糖尿病大鼠溃疡模型，应用ELISA、荧光PCR法测定了糖尿病性溃疡创面组织中AGEs、RAGE蛋白含量及RAGE mRNA的基因表达，应用ELISA、Western Blot及荧光PCR法测定了糖尿病性溃疡创面组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-6、TGF-β1、IGF-1蛋白含量及VCAM-1、ICAM-1mRNA 的基因表达，应用透射电镜观察了创面组织超微结构，应用HE染色、Masson染色及免疫组化法观察了创面组织病理变化，研究证实：糖尿病性溃疡大鼠创面组织中AGEs、RAGE表达显著升高，其信号通路中下游因子NF-κB p65、TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的表达在创面早期（第3天）较低，创面应激能力低下，在创面中晚期（第6、12天）则显著升高，呈过激炎症状态，病理结果亦显示创面组织炎性细胞浸润呈先抑后扬趋势，影响创面愈合。. 在上述基础上，本项目进行了美宝湿润烧伤膏（MEBO）对糖尿病大鼠溃疡的干预研究，研究表明MEBO能显著提高糖尿病性溃疡大鼠创面愈合速率，降低创面组织中AGEs、RAGE的表达，动态调控创面早期、中晚期创面组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-6、TGF-β1、IGF-1、VCAM-1及ICAM-1的含量，改善创面组织炎性细胞浸润，降低巨噬细胞CD68活化水平，促进成纤维细胞、毛细血管及胶原纤维生成，改善创面组织成纤维细胞及内皮细胞的超微结构，通过调控AGEs-RAGE信号通路促进糖尿病性溃疡创面的修复和组织再生。. 本项目研究明确了AGEs-RAGE信号转导通路在糖尿病性溃疡创面愈合过程中的表达，阐明了MEBO促进糖尿病性溃疡创面修复的部分药物作用靶点，为中医药“祛腐生肌”防治糖尿病性溃疡提供坚实的理论依据。