基于MMPs/TIMPs蛋白组学探讨MEBT/MEBO对糖尿病性溃疡创面修复的分子机制研究

Diabetic ulcer is one of the serious compliactions of dibetes. It is easy to diagnose but hard to be cured.With unclear patheogensis, diabetic ulcer is regarded to be closely related with abnormal accumulation of MMPs/TIMPs in skin tissure,Which can be regulated by TNF-α、IL-1β, EGF、bFGF,AGEs etc.The previous studies shows that MEBT/MEBO can significantly reduce the content of AGEs、TNF-α and increase the express of bFGF、EGF mRNA.SO the mechanism of MEBT/MEBO on wound healing may related to the MMPs/TIMPs signal transduction. Therefore,this program took MMPs/TIMPs signal transduction pathway as a starting point and applied ELISA, Western Blot, RT-PCR and immunohistochemistry to explain the effect of MEBT/MEBO on the expression of MMPs/TIMPs Signal Transduction Pathway in Diabetic Ulcer and the wound healing mechanism and drug targets from the protein molecular,providing a new research method for the TCM concept of remove rot myogenic on preventing diabetic ulcer.

糖尿病性溃疡是糖尿病严重并发症之一,临床上易诊断难治疗,发病机制尚不明确,目前认为MMPs在糖尿病性溃疡前后皮肤组织中时空表达异常及MMPs/TIMPs的失衡可能是糖尿病创面愈合延迟的重要机制之一,炎性因子(TNF-α、IL-1β)、生长因子(EGF、bFGF)、糖基化终末产物(AGEs)等可调节MMPs水平。我们前期研究发现MEBT/MEBO能降低糖尿病溃疡组织AGEs、TNF-α含量，提高bFGF、EGF mRNA表达，由此推测其促愈机制可能与调控MMPs/TIMPs系统有关。因此,本项目以MMPs/TIMPs系统蛋白为切入点,应用ELISA、Western Blot、RT-PCR及免疫组化等技术,研究MEBT/MEBO对糖尿病溃疡创面MMPs/TIMPs系统相关蛋白的影响,从蛋白分子角度探讨其促进创面修复的作用机制及作用靶点,为中医药“祛腐生肌”防治糖尿病溃疡提供理论依据和研究思路。

糖尿病性溃疡是糖尿病严重并发症之一，易诊难治，创面迁延难愈，目前其发病机制尚不明确，其中MMPs与TIMPs两类酶系统的表达异常及比例失衡可能是糖尿病性溃疡创面难以愈合的重要机制之一。本项目以MMPs/TIMPs为切入点，通过建立糖尿病大鼠溃疡模型，应用Western Blot、RT-PCR、ELISA等检测技术，检测了糖尿病性溃疡愈合过程中创面组织MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2及相关生长因子的蛋白基因表达，结果提示糖尿病性溃疡大鼠创面愈合过程中，创面组织MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9及MMP-13表达均显著升高，TIMP-1、TIMP-2表达明显下降，MMPs和TIMPs两者比例明显失衡，从而初步明确了MMPs/TIMPs系统在糖尿病性溃疡创面愈合过程中的作用机制。本项目同时开展了MEBT/MEBO对糖尿病大鼠溃疡的干预研究，研究显示MEBT/MEBO能够显著提高糖尿病性溃疡大鼠创面愈合速率，降低创面组织MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9及MMP-13等蛋白基因表达，升高TIMP-1、TIMP-2基因蛋白表达，改善创面组织炎性细胞浸润，降低创面组织IL-1β含量，提升胶原蛋白水平，提高生长因子TGF-β1、EGF含量，从而阐明了MEBT/MEBO促进糖尿病性溃疡创面修复的作用机制可能与MEBT/MEBO动态调控MMPs/TIMPs比例失衡状态，缓解胶原蛋白过度降解，维持ECM代谢平衡，调控创面生长因子等作用有关，为MEBT/MEBO防治糖尿病性溃疡提供坚实的理论支撑。