TRIB3基因表达对糖尿病大血管致纤维病变的作用及中药桃仁干预机制研究

Preliminary findings : macrovascular diabetic foot to intimal fibrous deposition, fibrous membrane hyperplasia ; macrovascular diabetic rats also associated with fibrosis. Recipe for THCQT vascular fibrosis significant improvement. Explore the relationship is now with TRIB3 vascular fibrosis gene expression , we propose : "High sugar and chronic inflammation caused TRIB3 abnormal gene expression and TLR-2, TLR-4 expression, which in turn activates fibrosing JNK, MARK and ATK signal transduction pathways , which ultimately caused the arterial fibrosis "scientific hypothesis. Using a rat model of diabetic vascular fibers in genetic , molecular level application PCR, immunohistochemistry and in situ hybridization techniques to TRIB3 gene for extracellular matrix (ECM) of the regulation as a starting point , from TLR2, TLR4 expression , JNK aspects , MARK and ATK signal transduction pathways , and many more angles imbalance ECM degradation mechanism to clarify the mechanisms of diabetic vascular fibrosis ; further investigate the effects of walnuts into the mold before and after fibrosis, the generation of cytokines induced fibrosis and regulation , inhibition of excessive ECM deposition and other aspects of the role of target.

前期研究发现：糖尿病足患者大血管病变以内膜纤维性沉积、中膜纤维性增生为主；糖尿病鼠大血管病变亦与纤维化相关。中药加味桃核承气汤对血管纤维病变有显著改善作用。现为探讨大血管纤维病变与TRIB3基因表达的关系，我们提出："高糖与慢性炎症刺激引起TRIB3基因表达异常及TLR-2、TLR-4表达上调，进而激活致纤维化JNK、MARK和ATK信号传导通路，终致动脉纤维病变"科学假说。采用糖尿病血管纤维病变大鼠模型，在基因、分子层面应用PCR、免疫组化、原位杂交等技术，以TRIB3基因对细胞外基质（ECM）的调控为切入点，从TLR2 、TLR4表达，JNK、MARK和ATK信号传导通路等方面，多角度进行ECM降解失衡的机制研究，来阐明糖尿病血管纤维病变的机理；进一步探讨中药桃仁于成模前及纤维化后，对致纤维化细胞因子的生成及调控，抑制ECM过度沉积等方面的作用靶点。

围绕"高糖与慢性炎症刺激引起TRIB3基因表达异常及TLR-2、TLR-4表达上调，进而激活致纤维化JNK、MARK和ATK信号传导通路，终致动脉纤维病变"科学假说，采用糖尿病血管纤维病变大鼠模型，运用RT-PCR、免疫组化、Western blotting技术，从TRIB3 基因、TLRs、MAPK、AKT及JNK 信号传导通路不同角度入手，探索糖尿病大血管纤维化的形成机制。并观察桃仁在造模早期、纤维化后不同时间与不同剂量干预对上述指标的影响，明确中药抑制纤维化调控点。 .取得研究结果具体为：①JNK是TGF-β1下游的一个重要信号通路，TGF-β1可以通过磷酸化JNK而介导FB的增殖，进一步促进以Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白为主的ECM的分泌，促进FN的过度聚集进而改变纤维化的发生发展。中药对JNK1、p-JNK1、JNK1mRNA的抑制作用与用药剂量及用药时间成正相关。中药桃仁可能是通过调节JNK信号通路的开放、抑制JNK1基因的表达、降低JNK1蛋白的生成与磷酸化，达到抑制血管纤维化形成。②模型组ERK1/2及其磷酸化p-ERK1/2表达升高，中药桃仁可降低ERK1/2及p-ERK1/2的生成与表达，可改善糖尿病大鼠大血管病变情况，以中药早期干预组和中药高剂量组最为明显，其干预作用与用药剂量和用药时间有关。③模型对照组大鼠股动脉AKT mRNA表达较空白对照组明显升高，使用中药干预后有不同程度的下降，并且以早期干预组和高剂量组下降明显。④TRIB3是糖尿病大血管纤维病变的参与基因。第1周，3周，7周TRIB3基因表达为：早期干预组与高剂量用药组逐渐下降；模型对照组不断上升；低剂量组呈先上升，后下降的趋势；中药桃仁可以降低其表达。⑤模型组中toll样受体通路的TLR-2、TLR-4表达显著增加。综上，在高糖、炎症刺激下toll样受体通路激活，MAPK信号通路（ERK、JNK）的活化，使JNK介导的FB增殖，促进ECM的沉积，进而改变纤维化的发生发展；此外TRIB3基因和Akt信号通路也是糖尿病大血管纤维病变的参与基因与通路。中药桃仁可以通过降低以上通路的活化来减缓血管纤维化。.本研究从致纤维化上游相关通路着手，发现调控纤维化的因素。初步寻找了桃仁干预糖尿病大血管纤维化的上游靶点。研究结果为糖尿病大血管纤维化机制研究提供基础。为中药抑制糖尿病血管纤维化作用提供了证据支持。