解毒通络法抑制AD血脑屏障转运Aβ的机制研究

How the Aβ was aggregated in the brain is the point in study on Alzheimer's disease. Recent studies have suggested that soluble Aβ in brain of AD patients may mainly comes from the blood, and BBB is the barrier of brain that inhibiting substances from the blood into the brain. The damage of structure and function of BBB could lead to neuronal injury caused by toxic substances from blood. Therefore, research on BBB in AD will be helpful to reveal the pathogenesis of AD and target from another angle. The study adopt the animal model of transgenic mice with dementia model and BBB in vitro model, to observe the changes of Aβ transported on BBB by the means of molecular biology, immunochemistry, radioimmunoassay, transmission electron microscopy and other technical means. Furthermore, the complex interaction of relationships of ROS-ERK1/2/PKC-NF-κB signaling pathway triggered by RAGE and Aβ transporter protein will be explored. At the same time, based on the TCM pathogenesis hypothesis of " the injury of collaterals by toxins", with Qingkailing intervention, to provide preliminary experimental evidence for the extended application of " dispelling toxins and dredging collaterals " treatment.

Aβ如何在大脑聚集增多是AD研究中的关键环节。新近的研究提示AD患者脑中可溶性Aβ可能主要来源于血液，而BBB是血循环物质进入大脑的主要屏障，其结构及功能的损害可直接导致有毒物质进入大脑，对神经元造成损伤。因此，研究AD病理状态下BBB对Aβ转运的改变将有助于从另一角度揭示AD的发病机制及作用靶点。本课题采用转基因老化痴呆小鼠模型和体外BBB模型，通过分子生物、免疫组化、放射免疫、透射电镜等技术手段，分别从体内和体外观察BBB对Aβ的细胞内转运途径和细胞旁转运途径的变化，并深入探讨经RAGE-Aβ触发ROS - - ERK1/2/PKC - - NF-κB 信号通路激活与Aβ相关转运蛋白表达之间的相互复杂关系。同时，基于"毒损脑络"的中医病机假说，以清开灵进行干预，为"解毒通络"治法的扩展应用提供初步的实验依据.

新近的研究提示AD患者脑中可溶性Aβ可能主要来源于血液，而血脑屏障(BBB)是血循环物质进入大脑的主要屏障，因此，其结构及功能的损害可直接导致有毒物质进入大脑，对神经元造成损伤。本课题采用转基因老化痴呆小鼠模型和体外BBB模型，分别从体内和体外观察BBB对Aβ的细胞内转运途径和细胞旁转运途径的变化，并深入探讨经RAGE-Aβ触发ROS -- ERK1/2/PKC -- NF-κB 信号通路激活与Aβ相关转运蛋白表达之间的相互关系。同时，基于“毒损脑络”的中医病机假说，以清开灵进行干预，观察药物对BBB转运Aβ的影响及可能的作用机制。.结果显示AD小鼠血液及脑组织中Aβ的含量较正常小鼠明显增加（p＜0.05）；清开灵可显著降低AD小鼠血液中Aβ的含量（p＜0.01），但对脑组织Aβ的含量影响较小，此外，清开灵能明显增加脑组织T-ChE活性和NO 含量（p＜0.05，0.01）。在AD小鼠的BBB中，转运蛋白RAEG和p-gp显著增加（p＜0.05），连接蛋白zo-1和claudin-5显著减少（p＜0.05）；清开灵能够抑制BBB转运蛋白RAEG和p-gp的转录和表达，同时促进连接蛋白claudin-5的转录和表达。通过电镜发现，清开灵能够改善AD小鼠海马区神经细胞形态结构完的整性，增加突触数量。本实验采用培养小鼠脑微血管内皮细胞系Balb/c，成功建立了体外BBB模型。清开灵能够显著抑制Aβ透过体外BBB模型，维持BBB结构及功能的完整性，并能明显抑制信号通路关键蛋白PKC的表达。.通过本研究结果证实，AD小鼠血液中Aβ较正常小鼠明显增加；同时，BBB转运蛋白RAGE表达增加及连接蛋白Claudine-5表达减少，这可能是导致AD小鼠脑组织中Aβ增加的原因之一。清开灵能够明显减少RAGE表达，并增加Claudine-5表达，保持BBB的结构的完整性，抑制Aβ的透过，这主要与抑制PKC信号通路有关。本研究结果为清开灵“解毒通络”治法的扩展应用提供了初步的实验依据，并进一步开拓了AD治疗的新思路。