肿瘤转移靶向肽TMTP1对微转移灶特异性标记及靶向清除研究

短肽是一种理想的肿瘤细胞靶向分子。申请者利用前期建立的新型肽库技术证实了一段对高转移细胞有很好的亲和作用5 肽序列（"TMTP1"肽）。本项目拟进一步研究TMTP1肽对肿瘤转移灶的早期诊断性示踪特异性和在靶向性抗肿瘤治疗中的作用，技术要点包括：构建荷瘤小鼠肿瘤转移模型，实时体视成像体内验证TMTP1 肽对肿瘤转移灶的靶向性；TMTP1肽与脂质体阿霉素交联，探讨TMTP1肽对高转移肿瘤及其转移灶的靶向性和抗肿瘤效应；采用Pulldown技术结合蛋白质组学及生物信息学分析寻找TMTP1 肽的细胞膜受体。本项目以肿瘤转移和复发的早期诊断和早期靶向治疗为切入点，探索TMTP1肽与化疗药物结合在靶向性抗肿瘤治疗中的作用，增强药物的靶向性治疗，减少毒副作用，具有广阔的临床应用前景。

短肽是一种理想的肿瘤细胞靶向分子。我们利用前期建立的新型肽库技术发现了一种对高转移细胞有良好的靶向亲和作用5 肽序列（“TMTP1”肽），在此基础上，我们进行了多肽TMTP1在肿瘤转移灶的早期诊断性示踪特异性和在靶向性抗肿瘤治疗中的作用的相关研究。研究结果显示，在构建成功的荷瘤小鼠肿瘤转移模型中，TMTP1不仅识别肿瘤原发病灶而且对转移侵袭的淋巴结、转移瘤或者肝脏的转移灶中亦有较强识别能力，并且FITC-TMTP1肽在体内的靶向识别能力与时间、浓度成正相关，预示着TMTP1肽在肿瘤的早期诊断、靶向识别与杀伤的可能应用前景；由于TMTP1-脂质体阿霉素制备存在困难，我们采用白喉毒素代替脂质体阿霉素，制备了一组TMTP1-DT融合蛋白，结果显示，融合蛋白DT390-biTMTP1，DT390-triTMTP1 可以显著抑制高转移前列腺癌和胃癌的皮下瘤生长，延长荷瘤小鼠生存时间。在胃癌原位移植模型中，DT390-biTMTP1， DT390-triTMTP1 显著抑制胃癌的发生的肝、脾、腹壁等处的转移，并且DT390-triTMTP1 抑制原发肿瘤生长及远处转移效果强于DT390-biTMTP1；进而我们利用Pulldown技术结合蛋白质组学及生物信息学分析寻找TMTP1 肽的细胞膜受体，结果发现膜结合蛋白aminopeptidase P （hAPP2，XPNPEP2）可能为其受体，通过竞争拮抗实验、aminopeptidase P蛋白表达水平及功能的验证，均提示hAPP2可能是TMTP1的细胞膜受体之一，且TMTP1诱导凋亡的作用机理可能是与hAPP2相结合后，部分失活PI3K-Akt通路，进而影响肿瘤细胞的存活。综上所述，TMTP1肽与药物偶联后可明显增强药物的靶向性治疗，减少毒副作用，有望成为临床新药，具有广阔的应用前景。