miR-126对CD4+CD25+调节性T细胞外周诱导的作用研究

CD4+CD25+调节性T细胞的外周诱导对体内其数量和功能维持有重要意义。新近研究显示miRNAs对CD4+CD25+调节性T细胞的数量和功能维持有重要作用，但未见对其外周诱导作用及机制的研究。本项目在前期研究发现CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤中数量增加和其高表达miR-126的基础上，进一步研究miR-126对CD4+CD25+调节性T细胞外周诱导的作用。建立CD4+CD25+调节性T细胞的外周诱导平台；利用慢病毒表达载体探讨改变miR-126表达后对CD4+CD25+调节性T细胞外周诱导的影响；进一步采用基因芯片技术结合WB探讨miR-126对CD4+CD25+调节性T细胞外周诱导的Akt-mTOR信号途径和其他信号途径分子的作用，初步明确miR-126作用的分子机制。本研究预期结果将为后续探讨miRNAs对调节性T细胞外周诱导的调控及相关肿瘤免疫治疗策略的开发提供新的实验依据。

近来研究显示miRNAs分子在免疫细胞发育、分化和功能中具有重要的调控作用。本项目围绕miRNAs家族成员-miR-126在CD4+CD25+调节性T细胞（Regulatory T cell, Tregs）外周诱导中的作用开展研究。已按期完成项目的研究内容，并发表了相关研究论文。我们的研究结果发现活化的或诱导的Foxp3+Tregs均高表达miR-126；利用慢病毒载体技术和反义核酸技术（Antisence oligonucleotides, ASO）下调miR-126的表达可显著抑制Tregs的外周诱导并削弱Tregs的抑制功能；利用TargetScan结合cDNA芯片技术筛选出miR-126的靶分子p85beta分子，Western Blot检测发现miR-126模拟物转染Tregs后可显著下调p85beta的表达；进一步研究发现miR-126 ASO转染可以明显增加iTregs诱导过程中p85beta的表达，且Akt信号途径传递明显增强；p85beta RNAi干扰技术和Akt抑制剂可逆转miR-126 ASO对iTregs诱导的作用，提示miR-126可通过对PI3K-Akt信号途径的调节，参与调控Tregs的外周诱导过程。项目研究结果为后续深入探索Tregs外周诱导机制以及基于Tregs外周诱导调控的临床相关疾病治疗提供前期实验基础。