SET在三氯乙烯肝细胞毒性中的作用及其机制研究

本研究拟在前期三氯乙烯（TCE）职业中毒差异蛋白筛选和验证基础上，选取具有重要生物学功能的三氯乙烯相关特异蛋白SET，应用亚细胞定位和siRNA干扰技术，通过对细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡、细胞色素P450代谢酶基因及相关原癌基因c-Jun、c-Myc表达水平和转录因子AP-1活性等指标的检测分析，探讨SET改变与三氯乙烯刺激后肝细胞定位、细胞间各指标的因果关系及时空联系。并结合近几年发展起来的Pull Down和磷酸化蛋白质组分析方法，联合使用串联质谱识别和鉴定与SET相互作用的蛋白和相关的磷酸化蛋白质。通过以上研究，明确SET在三氯乙烯诱导的肝细胞毒性效应中的作用，以揭示TCE职业中毒的遗传相关因子及可能机制，为最终能从蛋白质整体水平上认识TCE中毒发病机理和致癌机制提供理论依据，也为建立起更加先进、快速、灵敏、高效的职业毒物和环境污染物安全性评价方法提供新思路。

三氯乙烯（Trichloroethylene ，TCE）是一种工业上应用广泛的有机溶剂，主要通过呼吸道吸入和皮肤吸收进入机体，产生职业性危害，同时也是一种环境化学污染物。肝脏是TCE在体内的重要代谢场所和和主要受损器官之一，TCE对肝脏损害的分子机制仍不太清楚，也缺乏全面系统的研究。. 本研究在前期TCE肝细胞毒性差异蛋白筛选和验证基础上，选取具有重要生物学功能的TCE相关特异蛋白SET，应用亚细胞定位和siRNA干扰技术，通过对细胞增殖、细胞凋亡、PP2A活性及Caspase-3活性等指标的检测分析，探讨SET改变与三氯乙烯刺激后肝细胞内定位、细胞之间各指标的因果关系。并结合近几年发展起来的Pull-down技术和磷酸化蛋白质组学分析方法，联合使用串联质谱捕捉和鉴别与SET作用相关的蛋白质及其磷酸化修饰位点。通过以上研究，明确SET在TCE诱导的肝细胞毒性效应和致癌中的作用，以揭示TCE肝细胞毒性作用的可能机制，为最终能从蛋白质整体水平上认识三氯乙烯中毒发病机理和致癌机制提供理论依据。.重要结果：1. SET主要定位在细胞核中，随着TCE染毒浓度升高，其分布发生了由核内转向胞浆的转位变化。2．慢病毒介导的SET的下调部分阻止了TCE诱导的细胞活力的降低及凋亡的增加。同时，SET的下调抑制了PP2A活性的下降并阻止了caspase-3的激活。提示SET的上调介导了TCE的肝细胞毒性，其机制涉及到PP2A活性的抑制及caspase-3介导的凋亡。3．鉴定了62个与SET存在相互作用的蛋白质，其中45个蛋白与SET具有GO共注释，42个新的SET相互作用蛋白被鉴定。并选取2个蛋白eEF1A1和eEF1A2使用双向免疫共沉淀和Western blot得到了验证。4．鉴定了8个与SET功能相关的蛋白质和3个磷酸化蛋白，并选取3个蛋白得到Western blot验证。它们都与细胞凋亡密切相关，可能参与了L-02细胞的凋亡进程，提示这3个蛋白参与了SET介导的肝细胞毒性。.取得的主要成绩： 1．学术会议论文获奖2篇，国家发明专利授权2项。2. 共发表论文16篇，其中SCI论文4篇。 3．国际学术会议邀请报告3次，作为国际会议分会主席2次。4．共培养5名硕士。