低氧缺糖状态下皮层神经元GLUT3激活的转录调控机制

我们已经证实，脑缺血缺氧时，半影区神经元GLUT3表达上调以保证能量代谢底物的持续供应，对维持半影区的功能、生存力有非常重要的保护作用。但神经元GLUT3基因上调的转录调控机制是什么？至今尚不清楚！本项目拟建立皮层神经元低氧缺糖细胞模型，在GLUT3启动子荧光素酶报告载体基础上构建5＇端删除连续突变体重组子，确立低氧缺糖诱导GLUT3表达的启动子核心区以及可能存在的转录因子结合位点。进而用EMSA技术确定GLUT3基因启动子核心区的结合序列是否能够与这些转录因子结合； ChIP方法获得转录因子与GLUT3启动子核心区在细胞内结合的证据。并用SiRNA和构建的转录因子真核表达载体抑制/增强转录因子表达，观察GLUT3启动子核心区已知转录因子（Sp1/Sp3、CREB、AP-1等）的结合序列是否介导了GLUT3基因的转录调控。进一步阐明低氧缺糖状态下神经元GLUT3基因上调的转录调控机制。