光动力处理后人胶质瘤细胞TAP1基因表达上调相关MiRNA筛选及功能鉴定

Our initial study found that after PDT processing gliomas cells immunogenicity strengthens, and the first to demonstrate its and TAP1 expression and transport related antigen peptide functions strengthened; Then the high throughput and qualitative and quantitative RNA group study testing technology research found that, after some differences PDT tumor of expression miRNA may directly or indirectly through the transcription factors the nf-kappa B regulation TAP1 expression when these miRNA cut, to its target genes the nf-kappa B or TAP1 inhibition is abate, then may lead to tumor cells immunogenicity increase on that basis, we are planning to further through the in vitro culture system observed express/silence candidate after miRNA tumor cells are related antigen expression deferred protein spectrum and the nf-kappa B changes and to tumor cells immunogenicity influence, discusses in TAP1 miRNA executive antigen pass in the process of a role of luciferase report system through which the candidate miRNA identification control target genes, sure TAP1 regulation miRNA role in candidate way miRNA level PDT TAP1 lead to clarify after tumor cells immunogenicity enhanced molecular mechanism, and immune gene therapy for cancer to provide new theoretical basis and the potential therapeutic targets.

我们前期研究发现PDT处理后胶质瘤细胞免疫原性增强，并首次证实其与TAP1表达及转运抗原肽功能增强相关；进而采用高通量和定性定量的RNA组学检测技术研究发现，PDT后肿瘤某些差异表达的miRNA可能直接或间接通过转录因子NF-κB调控TAP1的表达。当这些miRNA下调时，对其靶基因NF-κB或TAP1的抑制作用减弱，继而可能导致肿瘤细胞免疫原性增强。基于上述基础，我们拟进一步通过体外培养系统观察过表达/沉默候选miRNA后肿瘤细胞表达抗原递呈相关蛋白谱和NF-κB的变化及其对肿瘤细胞免疫原性的影响，探讨miRNA在TAP1执行抗原递呈过程中所发挥的作用。通过luciferase 报告系统鉴定侯选miRNA所调控的靶基因，确定TAP1调控候选miRNA的作用方式。在miRNA水平阐明PDT后TAP1导致肿瘤细胞免疫原性增强的分子机制，并为肿瘤免疫基因治疗提供新的理论依据和潜在治疗靶点。

本项目获得资助以来，课题总体进展情况良好，各项研究工作基本按计划实施，基本完成计划规定的内容。在本项目的资助下，共发表论文2篇，其中SCI收录论文1篇，均为标注引用，另外课题的主体部分的研究成果目前正在撰写论文， 其创新性成果有望以通讯作者形式发表于SCI期刊。在本项目中我们发现过表达人脑胶质瘤细胞中TAP1蛋白的表达，可以上调 MHC-1 类分子的表达水平从而发挥其抗肿瘤作用，进一步在体内实验中通过过表达鼠胶质瘤细胞 GL261 的 TAP1 蛋白表达，可增强 MHC-1 在肿瘤细胞表面的表达水平，新合成的 MHC-1 分子组装形成抗原肽-MHC-1 复合物，转运至细胞表面被 CD8+T 淋巴细胞识别，从而促进机体对肿瘤细胞的抗原提呈，增强机体对肿瘤的杀伤作用，发挥抗肿瘤作用。同时，我们发现光动力处理处理后胶质瘤免疫原性增强，并首次证实其与TAP1表达及转运抗原肽功能增强相关；进而采用高通量和定性定量的RNA组学检测技术研究发现，光动力处理后肿瘤某些差异表达的miRNA可能直接或间接通过转录因子NF-κB调控TAP1的表达。光动力处理后胶质瘤细胞发生凋亡比率明显增加，这可能是光动力处理发挥治疗作用的关键，因此，我们进一步关注了光动力处理后miRNA表达谱发生的一系列变化，并且首次发现miR-27a/miR-27b/miR-29b/miR-24-2这四个miRNA下调时，其靶基因NF-κB或TAP1的表达抑制作用减弱，继而可能导致肿瘤细胞免疫原性增强。相关研究成果对阐述光动力治疗参与/促进TAPl及NF-κB表达上调的生物学机制，将成为研究光动力处理增强肿瘤细胞免疫原性分子机制的新切入点，具有一定的科学意义。