iASPP与Sertad1的相互作用对白血病细胞增殖和凋亡的调控

The iASPP as a novel suprressor of P53 is overexpressed and may inhibit apoptosis. Through yeast two-hybridization, we have demonstrated that iASPP binds Sertad1.In this proposal, we will investigate the roles of interaction between iASPP and Sertad1 in proliferation and apoptosis of leukemia cells.First,the interaction between iASPP and Sertad1 will be further verified.Second,we will identify the domain of Sertad1 mediated for binding iASPP.Third,the effect of interaction on expression and stability of iASPP and Sertad1 interaction will be illustrated.Forth, we will explore the impact of iASPP and Sertad1 interaction on transactivation mediated by p53. Fifth，the impact on cell cycle,apoptosis and proliferation brought by interaction between iASPP and Sertad1 will be investigated. This project may contribute to further reveal regulation mechanism of proliferation and apoptosis in leukemia cells, and identify novel targets for leukemia therapy.

iASPP是新近发现的一个p53的重要拮抗基因，在白血病细胞高表达，且可抑制白血病细胞凋亡。我们前期通过酵母双杂交发现iASPP与Sertad1结合。本项目针对iASPP与Sertad1相互作用在急性白血病增殖和凋亡中的作用进行研究：1、明确Sertad1蛋白能够与iASPP结合。2、确定Sertad1与iASPP相互作用的结构域。3、探讨iASPP3与Sertad1结合对两者表达和稳定的影响。4、研究iASPP与Sertad11结合对p53促转录活性的影响。5、探讨iASPP与Sertad1结合对白血病细胞周期、凋亡、增殖的影响。本项目会有助于进一步阐明白血病细胞的增殖、凋亡的调控机制，发现白血病新的治疗靶点。

研究目的：iASPP是P53基因的重要拮抗因子，目前已发现在白血病细胞中高表达，可抑制白血病细胞凋亡。我们通过酵母双杂交技术发现iASPP能够与Sertad1（SEI）结合，因此我们针对iASPP与Sertad1相互作用在急性白血病增殖和凋亡中的作用进行研究。.研究方法：采用免疫共沉淀及荧光共聚焦验证iASPP与Sertad1在不同细胞系中的结合，确定结合的结构域及亚细胞定位；在不同白血病细胞中高表达iASPP、Sertad1及两者共同高表达，筛选单克隆细胞，建立稳定高表达上述基因的细胞系；MTT法检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡；Western blot方法检测各单克隆细胞P53靶蛋白的变化。.研究结果：1. iASPP能够和Sertad1结合，定位于细胞浆近核膜的位置。iASPP可与Sertad1中CA、PB、C端三段结构域结合，唯独与S区域不结合。2．K562细胞中过表达iASPP，致细胞增殖加快，细胞周期被阻滞于G2/M期，抵抗化疗药物引起的凋亡能力明显增强，当iASPP和Sertad1同时高表达后细胞增殖明显减慢，细胞周期阻滞于G2/M期，抗凋亡能力下降，此时iASPP蛋白和Sertad1蛋白共定位发生改变，主要位于胞浆中。3. 高表达iASPP的K562细胞经过化疗药物处理后Puma蛋白表达量逐渐上升，且呈浓度和时间依赖性。.研究结论： K562细胞中P53蛋白虽然为突变型，但仍然具有一定的生物学功能，正常情况下iASPP和Sertad1均能在胞浆和胞核中穿梭，过表达的iASPP可以进入胞核，通过与P53结合，激活Puma蛋白，发挥抗凋亡、促进增殖的功能。但当iASPP和Sertad1同时高表达时，Sertad1能够通过在胞浆近核膜的位置结合iASPP，并将其阻滞在胞核外，最终达到抑制iASPP的功能。