X染色体连锁基因RSK4在乳腺癌中的功能研究

与常染色体相比，X染色体的独特性（只有一条处于活化状态）使得与其连锁的抑癌基因更容易失活，这使人们不禁推测X染色体连锁基因可能在肿瘤发生、发展中具有特别意义。我们前期研究发现X染色体连锁基因RSK4可能是乳腺癌的一个抑癌基因，为了检验这一发现，本项目拟通过原代培养从人乳腺癌标本中筛选并获取RSK4高表达和RSK4低表达的乳腺癌细胞，再对比研究两者在增殖、迁移、侵袭转移能力的差异及可能机制；此外，通过在RSK4低表达细胞中过表达RSK4、在RSK4高表达细胞中抑制RSK4表达，从体外和体内两个方面观察乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭转移能力的变化。通过以上研究，以期明确RSK4是否为乳腺癌的一个抑癌基因，并探索其作用机制，从而为进一步阐明乳腺癌的发生、发展机制及寻找乳腺癌治疗的新靶点开辟新思路和新途径。

与常染色体相比，X染色体的独特性（只有一条处于活化状态）使得与其连锁的抑癌基因更容易失活，这使人们不禁推测X染色体连锁基因可能在肿瘤发生、发展中具有特别意义。我们前期研究发现X染色体连锁基因RSK4可能是乳腺癌的一个抑癌基因，为了检验这一发现，本研究筛选出RSK4高表达与低表达的乳腺癌细胞株，通过CCK-8法、软琼脂克隆实验、Transwell迁移和侵袭实验比较细胞的增殖、迁移和侵袭转移能力；构建RSK4慢病毒表达载体和干扰载体，分别转染至RSK4低表达和高表达的乳腺癌细胞，建立裸鼠原位移植瘤模型，在体内外观察不同RSK4的表达对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响。发现：⑴RSK4在低侵袭转移潜能的乳腺癌细胞株MCF-7中表达水平最高，在高侵袭转移潜能的乳腺癌细胞株MDA-MB-231中表达量最低；⑵将RSK4慢病毒干扰载体转染到MCF-7，RSK4基因和蛋白表达均被抑制，细胞生长、侵袭、增殖能力增强，并可能通过影响肿瘤相关因子的表达变化而促进细胞的增殖侵袭以及粘附能力；由转染RSK4慢病毒干扰载体的MCF-7细胞建立的裸鼠原位移植瘤模型，移植瘤体积和重量均增加，且出现转移。⑶ 将RSK4 慢病毒表达载体转并染到MDA-MB-231细胞，RSK4基因和蛋白表达均显著增加，细胞生长、侵袭、增殖能力减弱，并可能通过影响肿瘤相关因子的表达变化而抑制细胞的增殖侵袭以及粘附能力。由转染RSK4慢病毒干扰载体的MDA-MB-231细胞建立的裸鼠原位移植瘤模型，移植瘤体积和重量均减少。由此可见，RSK4基因与乳腺的发生发展、侵袭转移关系密切，过表RSK4基因在体内可抑制乳腺癌生长，而 RSK4的低表达可促进乳腺癌的侵袭和转移，并可能通过Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin等肿瘤增殖侵袭转移相关因子发挥作用。