肝癌候选抑癌基因X染色体连锁基因FOXP3的鉴定及分子基础研究

X染色体连锁的抑癌基因只需经甲基化或突变等一次打击即可失活而致恶性肿瘤的发生发展，因而起着更为关键和核心的作用。我们前期发现，基因定位于X染色体的淋巴细胞"特异性"转录因子FoxP3表达于肝癌细胞，其DNA存在点突变/缺失，癌组织表达明显低于正常肝组织，体外实验证明过表达FOXP3可抑制肝癌细胞生长、RNA干扰沉默FOXP3表达后肝癌细胞生长显著加快。据此推测FOXP3可能是肝癌的抑癌基因。本研究拟通过建立肝细胞特异性FOXP3敲除鼠模型以及过表达和抑制FOXP3表达观察对肝癌发生及生长、侵袭、血管生成等生物学行为的影响，旨在阐明FOXP3是首个肝癌X染色体连锁的抑癌基因；并对FOXP3下调/失活机制及下游靶分子进行初步研究。其科学意义在于：丰富和完善肝癌相关抑癌基因的理论体系；为肝癌临床治疗提供新的高效靶点；解释肝癌高发于男性的特殊现象。

本项目基于理论和实践基础，提出并验证FOXP3在肝癌中作用的相关推测。X 染色体连锁的抑癌基因只需经甲基化或突变等一次打击即可失活而致恶性肿瘤的发生发展，因而起着更为关键和核心的作用。按照申请书既定的研究计划，本研究发现，基因定位于X 染色体的淋巴细胞“特异性”转录因子FOXP3 表达于肝癌细胞，且在肝癌细胞的胞浆和胞核均有表达，肝癌组织表达明显低于正常肝组织，预后分析发现肝癌胞浆高表达FOXP3者预后较好，而胞核高表达FOXP3中预后较差，提示胞核胞浆中FOXP3的功能差异；测序发现FOXP3在肝癌细胞中存在点突变、片段缺失/插入和异常剪接子；体内外实验证实，过表达FOXP3 野生型和突变型均可抑制肝癌细胞生长侵袭，而且以野生型FOXP3抑制功能最强；RNA 干扰沉默FOXP3表达后肝癌细胞生长侵袭显著加快。ChIP-seq分析提示，FOXP3 在肝癌中主要通过调控EMT过程、细胞核转录、TGF-β信号通路等下游信号分子网络发挥抑癌作用。相关研究结果已经整理成文，投稿CCR杂志。进一步研究发现，X染色体基因多态性与肝癌发生发展密切相关（发表于Clin Res Hepatol Gastroenterol. 2013 Dec;37(6):586-95），除外FOXP3基因突变，二代测序鉴定了UBE3C基因突变同样在肝癌发生发展中起重要作用（发表于Hepatology. 2014 Jan 15. doi: 10.1002/hep.27012）。本研究结果提示，FOXP3 可能是肝癌X 染色体连锁的抑癌基因，X染色体多态性及基因突变影响肝癌发发展。其科学意义在于：丰富和完善肝癌相关抑癌基因的理论体系；为肝癌临床治疗提供新的高效靶点。本项目共发表标注资助SCI论文6篇，1篇SCI论文已投稿；经费使用合理、有效，项目组成员分工协作良好、锻炼了研究团队；既定研究目标基本完成，且在原有计划和目标上有一定的拓展和深入。