外泌体lncRNA-H19靶向mir-194-5p调控SATB1在乳腺癌侵袭转移中的机制研究

It is a hotpots that how long non-coding RNA H19 existed in exosomes plays its role in migration and proliferation in human breast cancer.In our pre-research,we found exosomes H19 has great potential to be a diagnosis and prognosis factor in breast cancer.After down regulated of H19,the expression of miR-194-5p increased,followed the SATB1 expressed attenuated,hence,the potential of proliferation and migration of breast cancer decreased.Next,we co-incubated the MDA-MB-231 derived exosomes and above-mentioned cells,also,normal human breast epithelial cell.Both cells exhibited a stronger migration and proliferation potential.Increasing researches demonstrated SATB1 has high correlation with Wnt/β-catenin signaling pathway.There is no researches reports our pre-researches.In this study,we hope down regulation of H19 expression in two breast cancer cell lines,and construct miR-194-5p mimic and miR-194-5p inh interfere cell lines,then,co-incubating the MDA-MB-231 derived exosomes together.In vivo and in vitro assays will used to confirm the migration and proliferation potential of breast cancer cell lines.Follows,western blotting assays well used to detect the core protein expression of Wnt/β-catenin signaling pathway and EMT to confirm the mechanism.We hope our research will find a potential migration and proliferation ways in breast cancer and also find a new potential therapy target.

外泌体lncRNA-H19在乳腺癌侵袭转移中的作用和机制已成为当前一个研究热点。我们在前期研究中发现在乳腺癌细胞中下调H19表达会导致miR-194-5p表达量升高，SATB1表达降低，乳腺癌侵袭转移能力减弱，而在下调H19表达的细胞中和正常乳腺细胞中导入乳腺癌细胞来源的外泌体，则此现象可逆转。已有研究表明SATB1与Wnt通路有关。我们的前期研究发现未见文献报道。因此我们推测外泌体H19通过抑制miR-194-5p表达再介导Wnt通路调控SATB1表达从而导致乳腺癌侵袭转移。本课题拟在2株乳腺癌细胞中下调H19表达，再设计miR-194-5p mimic 和inh对细胞干预，再导入乳腺癌细胞来源的外泌体，体内外实验观察细胞侵袭转移的变化，再研究Wnt信号通路和EMT相关核心蛋白的表达以探讨其作用机制。从而为进一步阐明乳腺癌的发生、发展机制及寻找乳腺癌治疗的新靶点开辟新途径。

背景：乳腺癌是最常见的恶性肿瘤，是全世界女性癌症死亡的主要原因之一。有相当部分的中晚期乳腺癌患者，由于肿瘤已经转移并侵犯了其它重要的组织和器官，导致预后较差、死亡率高。截至目前为止，乳腺癌发生发展的具体机制，尤其是分子转移机制依旧是不明确的。外泌体的本质是脂质双分子层，富含生物活性分子，如核酸、蛋白质、脂质等，可存在大多数体液中。lncRNA可以作为致癌基因或抑癌因子在人类恶性肿瘤形成和发展的过程中起着至关重要的地位。lncRNA广泛参与染色质修饰、染色体失活、基因组印记、转录干扰、转录激活和核内运输等重要的调控过程。主要研究内容：1.血清外泌体lncRNA H19的检测及其临床诊断价值研究。2.lncRNA H19在乳腺癌中的作用及其机制研究。重要结果及关键数据：1.我们成功提取并鉴定了血清外泌体，发现乳腺癌患者血清外泌体lncRNA H19表达上调，lncRNA H19的诊断效能优于传统乳腺癌诊断标志物CA153和CEA，而且血清外泌体lncRNA H19的表达水平与淋巴结转移、远处转移、TNM分期、ER、PR和Her-2相关。2.lncRNA H19在乳腺癌组织和细胞中是高表达的，lncRNA H19能够促进乳腺癌细胞的增值、迁移和侵袭，但是抑制细胞凋亡。lncRNA H19通过竞争性结合miR-130a-3p靶向调控SATB1的表达来发挥促癌作用。lncRNA H19/miR-130a-3p/SATB1轴通过Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞的上皮细胞-间充质转化。沉默lncRNA H19可抑制乳腺癌细胞在体内的增殖能力。科学意义：我国人口基数大，乳腺癌发病率高，乳腺癌死亡人数居高不下，寻找乳腺癌早期诊断标志物及侵袭转移机制显得尤为重要。肿瘤细胞释放具有生物活性的外泌体在体液中的含量高，而且脂质双膜结构可以很好保护其内容物，我们发现乳腺癌患者血清外泌体lncRNA H19表达上调而且诊断效能较好，有望成为乳腺癌早期新型诊断标志物。lncRNA H19在乳腺癌中发挥了原癌基因作用，lncRNA H19可能海绵miR-130a-3p调控SATB1的表达加速乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡，并且通过Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞的上皮细胞-间充质转化，丰富了乳腺癌侵袭转移的机制，为乳腺癌的治疗提供可靠的理论基础。