操控CD70启动子区甲基化对免疫性血小板减少症自身免疫的影响及其机制

Immune thrombocytopenia (ITP) is an autoimmune abnormalities induced platelet generation, destruction accelerated common bleeding disorder. CD70 as a methylation-sensitive costimulatory factor, has an important role in immune regulation. Our previous studies have shown that CD70 over-expression and its promoter region hypomethylation in CD4 lymphocytes of patients with ITP and is involved in T and B lymphocyte activation and platelet destruction. On this basis, we intend to conduct CD70 DNA methylation targeted induction by siRNA-mediated DNA methylation. It would be demonstrated that the fine regulation mechanism of CD70 gene methylation in ITP. It would be investigated that the change of CD70 DNA methylation and the expression status in aberrant activation of T cells, B cells and DC subsets of ITP patients. It would be clear that its role in the reversal of the abnormal autoimmune through targeted regulation of the CD70 methylation status. And all of the results would be further confirmed in vivo in the ITP mice model. This study will be the first one to provide direct evidence for the link between methylation regulation and the immune system. Our results will clarify the CD70 methylation status in ITP pathogenesis and provide a theoretical basis for the development of new ITP treatment measure. Moreover, this study has an important reference for pathogenesis of other autoimmune diseases.

免疫性血小板减少症(ITP)是一种由于自身免疫异常所致的血小板生成、破坏加速的常见出血性疾病。CD70作为一个甲基化敏感的共刺激因子，具有重要的免疫调控作用。我们以前的研究显示ITP患者CD4淋巴细胞存在CD70过表达,与其启动子区低甲基化相关，且参与T、B淋巴细胞的活化及血小板的破坏。在此基础上，我们拟通过siRNA介导的DNA甲基化进行CD70的DNA甲基化靶向诱导，明确CD70基因甲基化的精细调控在ITP中的作用机制。研究ITP患者免疫异常活化后T、B、DC等不同细胞亚群CD70表达及甲基化的改变，并通过靶向调控其甲基化状态明确其在异常免疫逆转中的作用。再通过ITP小鼠模型体内实验进一步证实。本研究将首次为甲基化调控与免疫系统之间的联系提供直接证据，明确CD70甲基化在ITP发病机制中的地位，为发展新的ITP治疗措施提供理论基础，对研究其它自身免疫性疾病的发病机制具有重要的借鉴意义。

根据研究计划，本课题从CD70的角度研究其在ITP发病机制中的作用和角色。首先通过DNA甲基转移酶抑制剂5-AzaC和HDAC阻滞剂TSA对CD70甲基化的影响，与ITP病人CD70mRNA表达量的关系，证明了CD70的低甲基化、高乙酰化在ITP发病机制中的重要作用。对抗CD70抗体在树突状细胞(DC)介导的自身免疫中的作用及其机制进行了一系列研究。证实anti-CD70抗体的存在使DC细胞免疫亢进向更高程度发展。通过siRNA干扰DC上CD70的表达，发现siRNA干扰后的DCs可以抑制CD4+T细胞的增殖。提示CD27 / CD70途径可以抑制过度的炎症反应。而且慢性ITP患者的siRNA组中的DCs在诱导分化为CD4 + CD25 + CD127低Treg的CD4 + T细胞方面存在缺陷。进一步的研究还显示抑制CD70会影响ITP的Th1极化状态。上述研究提示对CD27/CD70途径的干扰可以开启治疗自身免疫性疾病的新观点。课题组对IL-17F基因的rs763780位点多态性与ITP遗传易感性之间关系的研究。发现IL-17F的rs763780位点多态性可能与中国ITP人群的发展存在相关关系。我们的研究还显示ITP患者存在sCD30和sCD26表达的异常，其可能在ITP的自身免疫性发病机制中发挥重要作用。我们还比较了不同剂量的静脉免疫球蛋白治疗成人和儿童ITP的临床疗效，并报告了三年随访结果。我们的研究结果显示亚标准剂量的免疫球蛋白治疗并不增加患者病程慢性化的比例。由于亚标准剂量免疫球蛋白的初步结果显示了和标准剂量疗效没有统计学差异，需要更进一步的随机对照研究进行证实，如获得证实，将获得更好的费用/效益比，使患者受益。通过本课题的资助，共计发表文章6篇，其中SCI收录2篇（第一作者或通讯作者），中文核心期刊4篇（第一作者/通讯作者3篇）。研究结果在国际国内会议发言3次（其中国际会议1次，全国性学术会议2次）。进行壁报交流3次（其中国际会议2次，全国性学术会议1次）。