原发免疫性血小板减少症中剪接因子SFPQ对T细胞稳态的影响及机制研究

Cellular immune abnormalities play crucial roles in the pathogenesis and development of Primary immune thrombocytopenia (ITP). In particular, unbalanced CD4+ T cell homeostasis is important for the production of autoantibody in ITP patient. We analyzed the T cell expression profile of ITP patients from GEO database and found that the expression of mRNA splicing factor SFPQ was decreased in ITP patients, which was recovered after ITP remission. We have also verified the decreased expression of SFPQ in CD4+T cells in ITP patients, suggesting that SFPQ may be related to the dysfunction of CD4+T cells. Further mechanistic study found that SFPQ could bind to YTHDC1, which is a reader protein of m6A modification, suggesting that m6A modification might recruit SFPQ through YTHDC1. This project intends to use molecular biology techniques, immunology techniques and ITP mouse model to elucidate the effect of SFPQ abnormal expression on T cell homeostasis in ITP patients, and explore the synergistic mechanism of SFPQ and mRNA m6A modification in mRNA splicing by high-throughput sequencing. Our project aims to find potential targets for the diagnosis and immune-modulatory therapy of ITP, and will provide theoretical basis for a better understanding of mRNA splicing.

细胞免疫异常在原发免疫性血小板减少症（ITP）的发生发展中至关重要，其中CD4阳性T细胞稳态失衡更是和患者自身抗体产生紧密相关。我们通过分析GEO中ITP患者T细胞表达谱芯片数据发现mRNA剪接因子SFPQ表达降低，ITP缓解后表达回升；也通过实验验证了ITP患者CD4+T细胞中SFPQ表达减少，提示SFPQ和CD4+T细胞稳态异常相关。进一步研究发现SFPQ可以结合mRNA m6A修饰识别蛋白YTHDC1，提示了m6A修饰通过YTHDC1招募SFPQ进行加工剪接的运作模式。本研究拟利用分子生物学、免疫学技术及ITP小鼠动物模型明确SFPQ异常表达对ITP患者T细胞稳态的影响；并结合高通量测序探讨mRNA剪接中SFPQ和m6A修饰的协同作用机制。本项目旨在为ITP的诊断和免疫调节治疗寻找潜在的靶点，并且将为更好地理解mRNA的剪接加工提供理论基础。

原发免疫性血小板减少症（ITP）是一种获得性自身免疫疾病，其发病机制较为复杂仍不明确，在蛋白分子水平更是缺少翔实的研究，这大大限制了相关基础研究向临床治疗的转化。可变剪接是基因转录后的一种精细调控模式，大约93%的基因都有可变剪接的产生。在多种自身免疫疾病中都有可变剪接异常被报道，但是产生可变剪接异常的原因还不清楚，这是本领域的难点问题并且可变剪接异常在ITP中也还未有研究。本项目探索了ITP患者和健康志愿者CD4+T细胞的表达谱和可变剪接谱，发现ITP患者CD4+T细胞中多个T细胞功能相关分子的可变剪接存在异常。已有文献报道SFPQ和HnRNPLL参与关键分子CD45R的可变剪接，我们进一步研究发现了ITP患者CD4+T细胞SFPQ表达显著升高且CD45R存在可变剪接差异。通过查询m6A数据库分析MeRIP数据发现CD45R可变外显子区域存在显著的m6A修饰富集，而体外的IP实验发现SFPQ能够和m6A修饰识别分子YTHDC1有相互作用并且SFPQ过表达能够促进YTHDC1对CD45R可变外显子区域m6A修饰的识别，提示了SFPQ可能通过m6A修饰调控CD45R的可变剪接。此外，本项目为了深入探索ITP患者CD4+T细胞可变剪接和功能异常的原因，我们在编码两类分子的基因中选择了几个自身免疫性疾病相关的关键单核苷酸多态性（SNP）进行分析：一类是与选择性剪接密切相关的表观遗传修饰相关分子;一类是与CD4+T细胞功能相关的检查点分子。我们对这些SNP进行测序并系统地分析了这些关键SNP与ITP发病及预后的相关性。本研究从可变剪接和关键分子SNP两个角度去审视和解读ITP发生发展中CD4+T细胞功能异常的原因，将为ITP的发病机制探索提供新的思路。