粘附分子介导的巨核细胞龛在ITP发病机制中的作用

Immune thrombocytopenia (ITP) is a kind of platelet production, due to autoimmune destruction caused by accelerated hemorrhagic disease. We studied the mechanism of megakaryocyte in reverse immune regulation in ITP. We established a platform of megakaryocytes enrichment separation, and found abnormal megakaryocyte expression of adhesion molecules. We speculated that ITP patients with bone marrow microenvironment may affect megakaryocyte differentiation and localization process and influence the autoimmunity of ITP. We intend this topic by positioning the relationship of ITP in bone marrow megakaryocytes and bone marrow microenvironment, and through over expression and silencing of PECAM-1 and SDF-1 and CD11a identify the effects on megakaryocyte differentiation. And further analysis of its impact on immune. Finally through the ITP active mouse model, studies on the effects of ITP mouse model of bone marrow megakaryocyte differentiation and maturation, localization of ITP and autoimmunity and its mechanism. This study will clearly affect patient’s bone marrow microenvironment of ITP on megakaryocyte and ITP antibodies, to further clarify the pathogenesis of ITP, and provide a theoretical basis for the development of new therapeutic measures.

免疫性血小板减少症(ITP)是一种由于自身免疫异常所致的血小板生成、破坏加速的出血性疾病。我们前期研究了巨核细胞对ITP反向免疫调控的机制。期间我们建立了巨核细胞分离富集培养的平台，并通过表达谱芯片发现巨核细胞表达粘附分子的异常。由此我们推断ITP患者的骨髓微环境可能影响巨核细胞的定位和分化发育过程，进而对ITP的自身免疫存在影响。我们拟通过本课题研究ITP患者骨髓巨核细胞的定位以及与骨髓微环境的关系，并通过过表达和沉默PECAM-1和SDF-1和CD11a明确其对巨核细胞成熟分化的影响。并进一步分析其对自身免疫的影响。最后通过ITP 主动型小鼠模型，体内研究对ITP 小鼠模型骨髓巨核细胞定位、分化成熟及对ITP自身免疫的影响及其机制。本研究将明确ITP患者骨髓微环境对巨核细胞及ITP自身免疫的影响，进一步明确ITP的发病机制,并为发展新的治疗措施提供理论基础。

根据研究计划，本课题主要研究ITP患者骨髓巨核细胞的定位以及与骨髓微环境的关系。首先我们明确了新诊断和慢性 ITP 患者血小板表面 APRIL 的表达量 MFI 明显低于健康对照组。然后我们体外诱导ITP患者的巨核细胞并进行分析及鉴定，诱导分化后的巨核细胞光镜下可见ITP患者巨核细胞体积减少，分叶变少。应用流式技术分析诱导分化后巨核细胞表面标志，与正常人相比，ITP患者骨髓CD34+造血干细胞分化成熟巨核细胞与未成熟巨核细胞未见显著统计学差异，而正常人分化成熟巨核细胞比例显著高于未成熟巨核细胞，提示ITP患者骨髓造血干细胞分化成熟巨核细胞存在缺陷。接下来我们检测了黏附分子通路在ITP患者和正常人诱导分化后巨核细胞中所起作用。通过与富血小板血浆及缺乏血小板血浆的共同孵育表明，PSGL-1与其受体P-选择素的相互作用可能在促进血小板介导的巨核细胞沿内皮细胞归巢中起重要作用。相比之下，PECAM-1和SDF-1/CXCR4轴似乎只在这种情况下发挥了次要作用。我们还对ITP患者及正常人骨髓巨核细胞的单细胞测序空间定位的研究，这部分研究尚未结束，还在进一步进行中。期间课题负责人以通讯作者发表学术论文11篇，其中SCI收录6篇，开展科研项目4项，参加国际学术会议2次（1个口头发言，7个poster）和国内学术交流6次（2个壁报；2个大会发言）。并结合云南的特殊地缘特点，开展了有针对性关于云南省ITP及出凝血疾病的临床和基础研究。