鼻咽癌中p53靶分子miR-34s的分子网络研究

60-80%以上的鼻咽癌组织和几乎100%的鼻咽癌细胞株有p53蛋白过表达或聚集现象。在鼻咽癌中p53蛋白未突变、高表达但未起到抑癌作用。miR-34s是p53的直接靶标，具有调控细胞增殖和凋亡的功能。项目拟以鼻咽癌中miR-34s作为目标靶，采用定量蛋白质组学方法，结合全基因组表达谱芯片和生物信息学技术分离、鉴定p53蛋白的高表达时miR-34s的靶蛋白；利用CHIP、CO-IP寻找与p53蛋白DNA结合区域的miR-34s靶蛋白及相互作用蛋白，用RNAi技术分别剔除鼻咽癌细胞中miR-34s靶蛋白和p53蛋白的表达，发现miR-34s靶蛋白在p53信号通路中作用。进一步研究miR- 34s靶蛋白、p53蛋白与鼻咽癌临床特征之间的关系。项目研究结果不仅有助于揭示鼻咽癌细胞中p53蛋白功能失活的分子机理，而且为阐明p53蛋白在鼻咽癌发病中的作用提供依据和新线索，具有重要的理论和实际意义。

MicroRNAs（miRNAs）是长度在20-23个核苷酸左右的内源性非编码小分子RNA，具有转录后基因调控功能。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国南方及东南亚常见的一种恶性肿瘤，具有高的侵袭和转移恶性。60-80%以上的NPC组织和几乎100%的NPC细胞株有p53蛋白过表达。本研究首先用生物信息学分析了24个与鼻咽癌相关microRNAs，分子网络涉及到肿瘤、内分泌紊乱、胃肠道疾病、生殖系统疾病、肝脏系统疾病、结缔组织紊乱和炎症疾病等通路。鼻咽癌中p53的靶分子miR-34c在鼻咽癌细胞中表达，构建高表达miR-34c载体转染鼻咽癌细胞，与对照组进行定量蛋白质组学分析，差异蛋白质102个，50个蛋白下调，52个上调，对这些分子进行网络分析，发现涉及糖原异生I、蛋白质泛素化通路、糖酵解I、非同源末端连接的DNA双链断裂修复、转录因子NRF-2介导的氧化性应激、端粒酶协助下的端粒延伸、网格蛋白介导的胞吞信号途径、外源性凝血酶原激活通路、心血管系统缺氧信号通路等通路。