瘤果黑种草子总皂苷抗类风湿关节炎作用机制研究

Nigella glandulifera Freyn et Sint. belongs to the Ranunculacea family. The seeds of Nigella glandulifera Freyn et Sint.(NGS) are a traditional Uyghur medicine. We researched its components and pharmacological activity of NGS for a long time. We found that the total saponins from NGS had shown anti-rheumatoid arthritis properties. And the total saponins from NGS are safe. This study is based on our research foundation of NGS. In this study, we will investigate the mechanism of anti-rheumatoid arthritis of the total saponins from NGS in adjuvant-induced arthritis rats and collagen-induced arthritis rats using technology of biochemistry, histology, ELISA and RT-PCR, etc. According to the pathological process of RA, we will take all these aspacts into consideration such as anti-inflammatory, immunity, the proliferation of synovial cells, influence on the formation of pannus, bone destruction when we investigate the mechanism. In this part, we will mostly discuss the effect of the total saponins from NGS on the level of cell factors such as IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-17, OPG, RANKL, MMP-3 and correlative mRNA in the rat serum. Through our research, we can apply scientific foundation to explain the mechanism of anti-rheumatoid arthritis of the total saponins from NGS. At the same time, our research is important to develop the value of NGS in Xinjiang.

瘤果黑种草（Nigella glandulifera Freyn et Sint.）为毛茛科植物，种子（NGS）是传统维吾尔药材。本课题组长期以来对NGS进行了较为系统的化学成分和药理活性的研究，研究中发现NGS总皂苷具有抗类风湿关节炎（RA）作用，且安全性好。本课题针对RA病理过程，以佐剂性关节炎大鼠和胶原诱导性关节炎大鼠为模型，拟从抗炎、免疫、对滑膜细胞增殖、对血管翳形成及对骨破坏的影响等多方面，以及从整体动物、细胞及分子水平多层次地开展NGS总皂苷抗RA作用机制研究，重点探讨NGS总皂苷对大鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-17、OPG、RANKL、MMP-3水平及相关因子mRNA水平的影响，最终阐明NGS总皂苷抗RA作用机制。

瘤果黑种草（Nigella glandulifera Freyn et Sint.）为毛茛科黑种草属植物，其种子（NGS）是维吾尔族习用药材，课题组前期研究发现瘤果黑种草子总皂苷（TSNGS）具有抗类风湿关节炎（RA）作用。故本课题针对RA病理过程，从抗炎、免疫、对滑膜细胞增殖、血管翳形成及骨破坏影响等方面开展了TSNGS抗RA作用机制研究。体外抗炎活性研究结果表明，TSNGS在一定剂量范围内对COX-1、COX-2、5-LO均有显著抑制作用；TSNGS在一定剂量范围内可显著降低LPS致RAW264.7急性炎症时NO、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA、iNOS、NF-κB p65 mRNA表达水平，说明TSNGS具有较好的抗炎活性。采用人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）研究TSNGS对滑膜细胞增殖的影响，结果表明，10、30、100 μg/mL的TSNGS可剂量依赖性的抑制HFLS-RA的增殖活性、迁移能力和黏附能力及TNF-α、IL-17、VEGF、Ang 1、Ang 2水平，从而发挥抗RA潜在作用。采用人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）研究TSNGS对血管翳形成的影响，结果表明，10、30、100 μg/mL的TSNGS可剂量依赖性的抑制HUVEC的增殖活性、迁移能力、黏附能力、管腔形成能力、血管新生相关受体蛋白VEGFR2和Tie2表达水平，从而发挥抗血管翳形成的作用。体内试验采用大鼠佐剂性关节炎（AIA）和胶原诱导性关节炎（CIA）模型，以雷公藤多苷和甲氨蝶呤作为阳性对照药，观察大鼠关节炎症状表现，并取关节组织进行病理学检查，同时重点考察了TSNGS对大鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、OPG、RANKL水平及相关因子mRNA水平的影响。研究结果表明，各剂量组（10、50、250 mg/kg）TSNGS对AIA和CIA均有较好的抑制作用，其作用机制是通过调节细胞因子和免疫系统平衡抑制炎症反应、调节血管生成相关因子抑制血管生成以及调节OPG/RANKL信号通路抑制骨破坏而发挥抗RA作用。本研究结果为进一步开发应用新疆特色资源瘤果黑种草子奠定了良好的基础。