CLU/STMN通路在耐药性癫痫发病机制中的作用

Epilepsy brings huge pressure to the society, and drug-resistant epilepsy is the key point which directly affect the general prognosis.Our study found that clusterin decreased in cerebrospinal fluid of drug-resistant epileptic patients. Our further study found that as the disease develop, clusterin decreased accordingly as well.Clusterin works as an anti-apotosis gene and has neuroprotective effection. Cluserin interact with stathmin in neurite outgrowth. We suppose that CLU/STMN pathway is activated in drug-resistant epilepsy.Co-immunoprecipitation assays are used to detect the expression of CLU/STMN pathway. RT-PCR and Western blot are used to detect the expression of every protein. Furthermore,in primary cultured neurons and drug-resistant cell model, antisense loigonuleotide is used to silent gene of the pathway respectively to study the pathgenesis of drug-resistant epilepsy. The results will get us much improvement to epilepsy treatment.

癫痫的发病造成了巨大的社会及经济压力，耐药性癫痫是影响其总体预后的关键。前期研究发现人凝集素（CLU）在耐药性癫痫患者脑脊液中的含量较对照组有显著差异，进一步研究发现随着癫痫的发生发展以及耐药性形成，CLU的表达呈进行性降低。CLU有抗细胞凋亡及脑保护作用，与磷蛋白（STMN）相互作用影响神经元轴突生长，参与异常神经网络形成。推测CLU/STMN通路参与了异常神经网络的构建与重塑,导致耐药性癫痫的形成。课题组拟运用免疫共沉淀技术检测CLU/STMN通路在耐药性癫痫患者术后海马组织中的表达，同时用RT-PCR、Western blot检测各蛋白在耐药性癫痫标本中的含量变化，了解其变化规律 。然后以离体的海马神经元培养及离体的抗癫痫药物细胞模型为基础，运用特异性反义寡核苷酸沉默通路中基因，研究CLU/STMN通路在耐药性癫痫发病机制中得作用，为临床治疗提供依据。

癫痫是严重危害社会公共健康的最常见神经系统疾病之一，其发作严重危害着患者的身体和心理健康，威胁社会及家庭的公共安全。神经异常网络的形成是导致癫痫反复发作的重要原因，也是导致癫痫耐药性形成的重要机制。我们研究发现人凝集素（CLU）在耐药性癫痫患者脑脊液中的含量较对照组有显著差异，进一步研究发现随着癫痫的发生发展以及耐药性形成，CLU的表达呈进行性降低，在癫痫患者颞叶皮质标本中CLU的表达也有上述规律。另一方面，我们实验发现STMN1在癫痫患者颞叶皮质中表达均较对照组增加，动物实验表明STMN1表达在癫痫发作急性期及潜伏期下降，而在发作慢性期表达显著增高。在STMN1高表达的标本中，我们还看到STMN1阳性细胞有神经纤维增生。海马组织中STMN1在癫痫急性期及潜伏期表达降低可能提高了微管的稳定性，抑制轴突生长。相反癫痫发作慢性期STMN1表达升高导致微管不稳定性增加，促进轴突伸长，因此促进苔藓纤维发芽，最终导致突触重塑，周期性兴奋环路形成，海马兴奋性增高，成为癫痫反复发作的基础。用免疫印迹方法研究氯化锂-匹罗卡品大鼠发作后不同时间及对照组大鼠海马中STMN2的表达，发现随时间推移，STMN2的表达呈先下降后上升趋势。STMN3在各实验组中的表达与STMN2具有相似性。用免疫印记法测定STMN3在颞叶癫痫患者颞叶皮质及对照组皮质的表达，发现癫痫组患者标本中蛋白表达较对照组升高，与大鼠氯化锂匹罗卡品模型慢性期标本中测定的表达规律一致。CLU有抗细胞凋亡及脑保护作用，与磷蛋白（STMN）相互作用影响神经元轴突生长，参与异常神经网络形成。我们的实验证实癫痫模型海马组织标本中确实存在CLU与STMN3的共表达，证实CLU及STMN3在癫痫海马组织中存在相互作用。进一步研究以离体的海马神经元培养为基础，运用特异性反义寡核苷酸沉默通路中基因，研究CLU/STMN通路在耐药性癫痫发病机制中的作用，为临床治疗提供依据。