ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴对肾小球微循环的影响及其机制研究

When chronic kidney disease comes to the end stage, the local RAS will be excessive. and then the processes of glomerular sclerosis and renal fibrosis started, which led to a progressive and irreversible renal damage. The results of recent research show that, the ACE/ACE2 ratio and Ang II/Ang-(1-7) ratio balance will be destroyed when chronic kidney disease procession starts. Given ACE I or ARB, the levels of blood plasma and urine ACE2 / Angiotensin-(1-7) will be increased. Using the in vivo 5/6 nephrectomy model and in vitro study, our research propose that the endogenous ACE2 and Ang-(1-7) level are associated with angiogenesis and local RAS in glomeruli and will have effect on the process of glomerular sclerosis. Given ACE2 or Ang-(1-7) with or without ARB, the classic RAS will be blocked in single or two pathways. The object of our study is to provide the new basis and clinical therapy for CKD through the research on the mechanism of the ACE2-Ang (1-7)-Mas axis and classic RAS system.

当肾脏病进入慢性阶段后，局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAS）的过度兴奋，将启动肾脏硬化过程，主要表现在肾小球硬化和肾间质纤维化，进而导致肾脏呈进行性、不可逆损伤。研究表明，当肾脏发生病变时，ACE/ACE2比值和Ang II/Ang-(1-7)比值的平衡将被破坏。本研究拟通过大鼠5/6肾大部分切除模型以及体外细胞培养，分别进行体内实验和体外实验观察：内源性ACE2和Ang-(1-7)水平对肾小球血管生成调节通路以及肾小球硬化的影响以及与局部RAS的关系；了解外源性给予ACE2或Ang-(1-7)对抗ACE-Ang II-AT1轴的作用，或/和给予ARB药物，单相/双向阻断经典RAS途径对肾小球硬化病变程度的影响。本研究旨在探讨ACE2-Ang(1-7)- Mas轴与经典RAS相互拮抗的作用机制，进而为慢性肾脏病临床用药提供理论实验依据和新路径。

ACE2-血管紧张素(l-7)-Mas轴具有对抗肾素-血管紧张素系统、抗增生和抗纤维化特性。本课题拟探讨血管紧张素(1-7)单独或联合ARB药物对肾脏损伤的保护作用。分别建立5/6肾切除大鼠、单肾切除联合AngII输注的肾小球硬化模型、子痫前期患者血清诱导的足细胞损伤等多种病理模型。研究结果显示：1）Ang-(1-7)和losartan均可显著降低5/6肾大切SD大鼠的血压，减少24h尿白蛋白及降低血清肌酐水平，改善肾小球硬化和间质纤维化，A779能部分阻断losartan的上述保护作用，Ang-(1-7)减轻 5/6Nx大鼠肾小球硬化的机制可能与其抑制gp91phox的表达有关。2）Ang-(1-7)能减轻AngII所致的小鼠肾小球硬化，表现为24h尿白蛋白和血清肌酐水平的降低、肾脏病理的改善及collagen I的减少，可能通过下调desmin表达，维持足细胞数目及抑制p91phox的表达有关。3） AngII可引起体外培养的小鼠足细胞Mas蛋白的下调，Ang-(1-7)可改善AngII干预引起的足细胞裂孔膜蛋白CD2AP、podocin表达的下调，以及gp91phox的上调和Bcl-2/Bax蛋白表达下调，提示Ang-(1-7)可能通过NADPH氧化酶途径及Bcl-2、Bax信号通路减轻AngII所致的足细胞损害及凋亡。这一保护作用可为Mas的阻断剂A779所阻断。4）Ang-(l-7)可缓解子痫前期患者血清诱导的足细胞损伤，MAPK(p38、ERK1/2、JNK)的磷酸化增加可能是导致子痫前期患者血清诱导足细胞损伤的原因之一，Ang-(1-7)可通过部分抑制MAPK的磷酸化产生对足细胞的保护作用。5）此外，我们的研究还进一步证实，EGFR抑制剂埃罗替尼（Erlotonib）在醛固酮诱导的肾脏损伤中的作用。体内外研究结果表明，埃罗替尼处理能明显缓解醛固酮导致的肾脏损伤，抑制促纤维化因子α-SMA、TGF-β1及细胞外基质成分Ⅳ型胶原、纤连蛋白的表达，降低细胞的增生及迁移。醛固酮的促纤维化作用是通过ROS激活EGFR/ERK信号通路促进纤维化的产生，EGFR在其中发挥着重要的作用。综上，本课题探讨了ACE2-Ang(1-7)- Mas轴与经典RAS相互拮抗的作用机制,进而为慢性肾脏病临床用药提供理论实验依据和新路径。