靶向抑制Hedgehog/EGFR对胰腺癌的治疗作用及其交叉对话机制研究

Hedgehog信号通路与表皮生长因子受体(EGFR)信号通路的交叉对话可能与胰腺癌的发生发展密切相关，并与目前单纯靶向EGFR治疗胰腺癌效果不佳有关。为此，本课题在Hedgehog信号通路激活促进胰腺癌侵袭转移的基础上，通过免疫组化、western blot、Real time-PCR等方法检测胰腺癌组织中Hedgehog信号通路蛋白和EGFR的表达，分析两者与临床病理的关系及相关性；应用RNAi技术研究Hedgehog、EGFR信号通路对胰腺癌细胞系生长转移潜能的影响；通过裸鼠手术原位种植模型研究靶向抑制Hedgehog及EGFR信号通路对胰腺癌的治疗作用，并从抑制Hedgehog通路能否抑制EGFR表达及旁路抑制EGFR通路活化等方面进行机制研究，为以Hedgehog-EGFR通路为靶点的胰腺癌治疗提供可行性依据

胰腺癌是预后极差的消化道恶性肿瘤之一，表皮生长因子及其受体(EGF／EGFR)系统在调控胰腺癌细胞增殖过程中发挥重要作用，但选择性靶向EGFR的治疗效果仍有限，需要进一步探索有效的联合治疗手段。本课题研究显示Hedgehog信号通路靶基因Gli-1与EGFR在胰腺癌组织中的阳性表达率分别达到74.3%和71.6%，均显著高于癌旁胰腺组织；其中Gli-1阳性表达与患者淋巴结转移及预后显著相关，而EGFR阳性表达则与患者肿瘤分期、淋巴结转移情况及预后显著相关；采用慢病毒介导的RNAi抑制胰腺癌细胞EGFR的表达，胰腺癌细胞增殖能力下降，对Hedgehog通路阻断剂环巴明的敏感性显著增加，联合阻断Hedgehog通路可进一步抑制胰腺癌细胞的增殖能力及侵袭转移能力，促进细胞凋亡；体内研究进一步证实Hedgehog和EGFR两个通路在凋亡和增殖方面存在协同作用；靶向抑制EGFR可显著降低胰腺癌细胞ERK和AKT磷酸化水平，同时应用环巴明处理，二者磷酸化水平均进一步降低，提示其协同机制可能与调控RAS-RAF-MEK-ERK/MAPK和PI3K-AKT通路活性有关；阻断Hedgehog信号通路后胰腺癌细胞中EGFR蛋白及mRNA表达均显著下调，提示Hedgehog在转录水平影响EGFR的表达；通过构建EGFR启动子全长序列（2315bp），并对5’非翻译区进行一系列的缺失突变，结合分析软件预测其转录结合位点，证实Hedgehog信号通路相关蛋白的转录结合位点在EGFR启动子转录起始位点上游-2030bp到-2213bp之间。目前课题组已培养3名博士研究生，获得博士学位；在读2名科研型博士研究生、2名临床型博士研究生正在进行该项目研究。课题研究阶段，2名课题组成员赴德国Ulm大学进行学术交流及成果展示。课题组已发表三篇SCI论文，三篇论文分别被中华医学杂志、中华实验外科杂志录用。