针刺改善IVF-ET中子宫内膜容受性的VEGF调控机制研究

We find that the Endometrial Blood Vessel Generation is an important part of the establishment of Endometrial Receptivity. We have demonstrated in previous experiments: Acupuncture in IVF-ET treatment can effectively improve Endometrial Receptivity and improve the pregnancy rate, therefore, we propose a VEGF signaling pathway in Acupuncture can improve Endometrial receptivity, thus improving the success rate of IVF-ET Hypothesis. Around the hypothesis intends to adopt the rat model of IVF-ET, through methods of acupuncture, acupuncture combined with blocker, research the related indexes effect performance that acupuncture on the VEGF signaling pathway in endometrial. Using experimental techniques such as Morphological observation, ELIAS, Immunohistochemistry, Real-time quantitative PCR, Methylation-sensitive high resolution melting curve method(MS-HRM), to complete the research of observing the Effect of acupuncture interference IVF-ET, Blocking the impaction VEGF to the effect, the relationship VEGF or gene methylation in its receptors with effect. From the molecular level clarify the adverse effects and mechanism action that acupuncture will improve IVF-ET super ovulation of endometrial receptivity, through adjust VEGF signaling pathway, to provide a scientific basis for acupuncture in IVF-ET treatment.

目前研究认为子宫内膜血管生成是子宫内膜容受性建立的重要环节，我们在前期实验中已经证实：针刺在IVF-ET治疗中可以有效的改善子宫内膜容受性，提高受孕率，因此我们提出了VEGF信号通路介导针刺能够改善子宫内膜容受性，进而提高IVF-ET成功率的假说。围绕这一假说拟采用IVF-ET大鼠模型，通过针刺、针刺结合阻断剂等方案，研究针刺对子宫内膜中VEGF信号通路的相关指标的效应表现。利用形态学观察， ELIAS、免疫组化、实时荧光定量PCR、甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS-HRM）等实验技术，完成观察针刺干预IVF-ET的效应、阻断VEGF对效应的影响、VEGF或及其受体的基因甲基化与效应的关系的研究，从分子水平阐明针刺通过调节VEGF信号通路改善IVF-ET中超排卵导致子宫内膜容受性不良影响及作用机制，为针灸介入IVF-ET治疗方案提供科学依据。

控制性超排卵体外受精-胚胎移植（In Vitro Fertilization and Embryo Transfer， IVF-ET）技术目前已在临床较广泛地运用，但是长期徘徊在20% ～ 30%较低的水平。导致IVF-ET失败的因素中60%与子宫种植窗的提前关闭，子宫内膜容受性下降有关，而这与促排卵本身关系密切，成为IVF-ET的难点。针灸已经逐步介入IVF-ET临床治疗中，并取得了一定的疗效。.本研究采用IVF-ET大鼠模型，通过针刺、针刺结合阻断剂等方案，利用形态学技术， ELIAS、免疫组化、PCR，基因芯片等实验技术，观察针刺干预IVF-ET的效应、阻断VEGF对效应的影响、及针刺影响的基因变化。免疫组化结果发现模型组VEGFR2蛋白不仅在子宫内膜上表达明显，在子宫肌层中有异常高表达，对照组的肌层没有明显表达，治疗组对比模型组子宫肌层中表达明显下降；PCR结果发现VEGF mRNA表达模型组与对照组比较，是对照组的0.680倍，下降趋势明显；治疗组与对照组比较，是对照组的0.884倍，有明显上升趋势，子宫内膜容受性相关因子（整合素αvβ3、LIF、Hoxa-10） mRNA的表达模型组与对照组比较下降趋势明显，治疗组与模型组比较有明显的上升趋势；基因芯片结果显示模型组比对照组有567个基因上调、760个基因下调，治疗组比对照组有307个基因上调、624个基因下调，治疗组比模型组有271个基因上调、308个基因下调。.结果发现促排卵过程中子宫肌层出现过高的VEGFR2蛋白表达，这可能反馈性调节了VEGF、VEGFR2的转录过程，快速下调了VEGF、VEGFR2 mRNA的表达，从而使子宫内膜容受性相关因子的表达紊乱，种植窗口期提前关闭。针刺治疗可以有效调控VEGFR2的这种异常表达，回调子宫内膜容受性相关因子的表达，从而纠正种植窗口期与受精卵着床的同步性，维护子宫内膜容受性。但这并不是针刺起效的唯一途径，基因芯片图谱为我们打开一扇信息大门，寻找到各组间的差异基因，为我们寻求针灸的作用靶点提供有效价值。本研究证实针刺治疗能够调节VEGF及其受体通路，改善子宫内膜容受性，能够提高IVF-ET疗效，为针刺在临床中介入IVF-ET治疗推广提供了科学依据。