小檗碱调控川崎病内皮祖细胞再内皮化功能及其分子机制研究

To prevent and treat the coronary artery lesion induced by kawasaki disease (KD) is an important task in the field of acquired heart disease of children. The reendothelialization ability of circulating endothelial progenitor cell (EPC) was closely correlated with the coronary artery injury. The down-regulation of reendothelialization ability may accelerate the onset and development of coronary artery disease. Our previous studies have proven that: the proliferative, adhensive and migratory abilities of circulating EPC in KD patients were damaged; Berberine (BR) enhanced the proliferative, adhensive and migratory abilities of circulating EPC in vitro. However, the molecular mechanisms underling BR regulating EPC's reendothelialization abilitiy have not been elucidated yet. As the entending and expanding research based on our previous studies, the present study was designed to investigate the whether BR can upregulate the reendothelialization ability of EPCs in KD through PI3K/AKT/eNOS pathway using cell culture, immunological and molecular biological technique and experiments based on animal model. The present study will provide new idea and strategy for treating and preventing of coronary artery pathological changes in KD.

防治川崎病（Kawasaki Disease，KD）诱发的冠状动脉损伤是儿童获得性心脏病领域的重要问题。循环内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cell,EPC)的再内皮化功能与冠状动脉损伤密切相关，其再内皮化功能的下降加速冠状动脉病变的发生和发展。我们的前期研究发现：KD患者循环EPC的增殖、贴壁和迁移功能受损；小檗碱（Berberine，BR）可以增强体外诱导培养的EPC增殖、贴壁和迁移功能。但KD状态下BR调控EPC再内皮化功能的分子调控机制尚未阐明。作为我们前期研究的延伸和拓展，本研究拟运用细胞培养技术、免疫学技术、分子生物学技术和动物实验，研究小檗碱调控KD状态下EPC内PI3K/AKT/eNOS信号通路的作用，及其对EPC再内皮化功能的影响。本研究将为KD冠状动脉病变的防治提供新的思路和策略。

川崎病所导致的冠状动脉损伤是儿童后天性心脏的主要病因，对川崎病的病因及其诱发冠状动脉损伤的机制研究具有重要的意义。本课题在立项三年来，从体外细胞研究、在体动物实验和临床病例的免疫学机制研究，重点阐述 ①小檗碱对川崎病状态下内皮祖细胞功能的保护作用，其保护作用主要是通过激活PI3K/AKT/eNOS信号途径实现的 ② 小檗碱可加速颈动脉损伤小鼠内膜的修复过程 ③小檗碱可以抑制川崎病模型小鼠冠状动脉炎症细胞浸润的作用同时可以减少冠状动脉管壁弹力纤维的断裂 ④ HIF-1α异常活化导致的Th17/Treg细胞失衡可能与KD的发病有关 ⑤KD急性期存在Th17基因组蛋白甲基化异常修饰 ⑥ p300-TIP60 / Sirt1 表达失衡所导致的 Foxp3 蛋白乙酰化水平低下可能与急性期 KD 患儿免疫功能紊乱有关 ⑦ 通过iTRAQ蛋白组学定量技术发现川崎病状态下主动脉内皮细胞的蛋白表达模式发生改变，这些差异蛋白涉及内质网应激/细胞基质等信号系统。. 本课题在国内外率先开展中草药小檗碱防治川崎病冠状动脉损伤的研究，发现小檗碱可以通过PI3K/AKT/eNOS信号系统改善川崎病状态下EPC的功能并抑制川崎病模型小鼠冠状动脉的验证细胞浸润和弹力纤维断裂。该研究结果具有重要的意义，将为临床使用小檗碱防治川崎病冠状动脉损伤奠定实验基础。本课题组同时也开展了川崎病急性期免疫调节方面的研究，相关研究结果已发表。这部分研究成果在川崎病的免疫发病机制方面居于国内领先位置，对揭示川崎病的发病机制具有重要意义。该课题的资助开展的蛋白组学研究结果，将为我们接下来的工作提供广阔的空间。