血管内皮祖细胞与川崎病冠状动脉损伤及修复关系的研究

川崎病(KD)冠状动脉并发症已经成为儿童最常见的后天心脏病，合并冠状动脉瘤(冠脉瘤)者治疗棘手，是儿科心血管临床难题，主要原因为冠脉廇的发生机制不清，血管内皮祖细胞(EPC)数量或功能减低所致的冠脉内皮修复障碍可能是其机制之一。本研究拟以CD34/CD133/KDR+为EPC分子标志，流式细胞仪计数KD患儿发病急性期外周血EPC数量；以CD45dim/flk-1/CD34+为小鼠EPC分子标志，测定LCWE诱导的小鼠KD模型外周血EPC数量及骨髓EPC功能，以确定KD急性期EPC的数量及功能改变及与冠脉瘤发生的关系。同时，自同种小鼠骨髓提取EPC，体外培养、标记后回输模型鼠，检测外源性EPC对模型鼠冠脉瘤发生的影响及是否直接参与冠脉瘤修复；通过注射粒细胞集落刺激因子，检测刺激自体EPC释放对冠脉瘤发生的影响，探讨EPC与KD冠脉损伤及修复的关系，为通过增加EPC治疗KD冠脉瘤提供依据。

川崎病(KD) 是高发于亚裔儿童的发热性疾病，发病率逐年增高，其冠状动脉并发症已经成为儿童最常见的后天心脏病，合并冠状动脉瘤(冠脉瘤)者治疗棘手，是儿科心血管临床难题，主要原因为冠脉瘤的发生机制不清，血管内皮祖细胞(EPC)数量或功能减低所致的冠脉内皮修复障碍可能是其机制之一。本研究以CD34/CD133/KDR+为EPC分子标志，流式细胞仪计数KD患儿发病急性期外周血EPC数量；以CD45dim/flk-1/CD34+为小鼠EPC分子标志，测定酪乳杆菌细胞壁提取物（LCWE）诱导的小鼠KD模型外周血EPC数量及骨髓EPC功能，结果显示KD患儿急性期外周血EPC数量明显低于对照组，而亚急性期EPC数量较急性期则显著升高；LCWE单次腹腔注射所制备的KD模型冠状动脉病变模拟了KD患儿冠状动脉损伤的形成过程，对不同病程阶段循环EPC数量的检测显示，KD模型小鼠在急性冠状动脉炎症期，外周血中循环EPC的数量显著减少，这一改变一直持续到冠状动脉弹力层发生破坏的阶段，且无论是在冠状动脉急性炎症期，还是弹力层破坏的亚急性期，其骨髓EPC的体外克隆形成能力均明显降低，其增殖、黏附、迁移能力亦存在不同程度的下调，证明KD急性期EPC的数量及功能存在下调，且EPC数量及功能改变及与冠脉损伤发生有关。经反复试验，研究成功采用全骨髓培养的方式分离和扩增了同种小鼠骨髓EPC；外源性EPC经荧光素标记后尾静脉注射KD模型小鼠，发现外源性EPC移植能够归巢到受损伤的冠状动脉内膜层，通过内皮修复显著地抑制弹力层的破坏，同时KD模型小鼠自身EPC的数量和功能也得到了一定的改善，证明EPC参与了KD冠状动脉损伤的修改，外源性EPC移植可以改善KD冠状动脉损伤的程度，达到一定的治疗作用。另外，为探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）预防川崎病冠状动脉损伤的可行性及其对内皮祖细胞动员的影响，研究于第5～9天对KD模型小鼠注射重组人G-CSF，发现CSF能够显著上调循环EPC的数量及骨髓EPC的功能，同时有效阻止冠状动脉弹力层的破坏，从而达到预防KD模型小鼠冠状动脉损伤发生的目的。通过本研究初步证实EPC数量和功能的下调与KD冠状动脉损伤的发生存在明显的相关性，通过上调EPC数量和功能可以显著减轻或抑制KD冠状动脉损伤的发生，为了解KD冠状动脉病变的发生机制和治疗提供了一个新的思路。