肿瘤-睾丸抗原55与p53相互作用在肠癌发生中的分子机制

Colorectal cancer is one of the most common malignant tumor of digestive system, and the incidence rate is increasing year by year. The pathogenesis of colorectal cancer is not completely clear. Cancer-testis antigens, as tumor markers, play an important role in tumor diagnosis and immunotherapy. However, the mechanism of most cancer-testis antigen is not clear. Our previous research indicated that cancer-testis antigen 55 (CT55) is an interaction protein of p53. Furthermore, we found that knockdown of CT55 inhibited cell proliferation. We also found that overexpression of CT55 can activate the DNA damage signaling pathway and induce p53 expression. Therefore, we we build hypothesis that he interaction between tumor-testis antigen CT55 and p53 contribute to colorectal cancer progression which play role in the cell growth, invasion, and metastasis. In this project, we plan to study the molecular mechanism of the interaction between CT55 and p53 in colorectal cancer progression, progression,enrich the molecular biology theory and finally contribute to the therapeutic use of CT55 in colorectal cancer.

肠癌(CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一，且发病率处于逐年上升的趋势，目前CRC的发病机理尚未完全明确。肿瘤-睾丸抗原作为肿瘤标志物或治疗靶标，是肿瘤诊断和免疫治疗的研究前沿，迄今大部分肿瘤-睾丸抗原与肿瘤发生机制的关系还不明确。我们在前期工作中发现，肿瘤-睾丸抗原55（CT55）是一个新的与p53发生相互作用的蛋白。进一步实验证明，敲除CT55的CRC细胞增殖受抑制，我们还发现CT55可以激活DNA损伤信号通路并诱导p53蛋白表达。因此，我们提出假说在肠癌发生中，CT55与p53发生相互作用并调控p53的功能，进而在CRC细胞的增殖、侵袭和转移中发挥作用。本项目拟明确CT55与p53相互作用在肠癌发生中的分子机制，丰富CRC相关分子生物学基础，为CRC免疫治疗的研究提供新的靶标。

结直肠癌是临床常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率占消化道系统恶性肿瘤的首位。其发病机制复杂，是多因素、多步骤、内外因交互作用的结果。明确其发病机制，寻找有效的治疗靶标是亟待解决的问题。.睾丸肿瘤抗原（CT抗原）在包括结直肠癌在内的多种肿瘤的免疫治疗中发挥重要作用。CT55作为潜在的CT抗原，研究报道其在结直肠癌中高表达，但是功能和作用机制尚不明确。我们通过免疫印迹检测12对结直肠癌及癌旁组织，证明CT55在结直肠癌组织中高表达。利用CRISPR-CAS9技术构建了Ct55敲除小鼠，用AOM/DSS诱导野生型及Ct55敲除小鼠构建肠炎诱导结直肠癌模型，Ct55敲除小鼠肠组织肿瘤数量、体积显著减小,直肠脱垂程度减轻。Ct55敲除小鼠肿瘤组织切片苏木素伊红染色结果显示炎症细胞减少，免疫组化结果显示肿瘤细胞增殖减弱。实时荧光定量PCR显示炎症相关因子NF-α、IL6、COX2、Ccl2，增殖/迁移相关因子PCNA、cyclinD1在Ct55敲除小鼠中表达水平有显著降低。HCT116 CT55敲除细胞RNA-seq结果显示CT55与NF-κB信号通路关系密切，采用免疫印迹、免疫共沉淀、荧光素酶报告基因、免疫荧光共定位实验等方法证明CT55能够与NF-κB信号通路中关键蛋白IKK复合物相互作用，并能够促进下游关键蛋白IκBα的磷酸化，促进p65入核激活下游靶基因的转录。IKK抑制剂能够阻断CT55对IκBα的磷酸化以及对p65入核的影响。.这些数据表明，CT55通过调控NF-κB信号通路参与结直肠癌的发生，提示CT55可能是结直肠癌治疗的潜在靶标。